尹原妍

(江苏省畜产品质量检验测试中心，江苏南京 210036)

液相色谱法检测饲料中醋酸氯地黄体酮的方法研究

尹原妍

(江苏省畜产品质量检验测试中心，江苏南京 210036)

醋酸氯地黄体酮具有广泛的用途，尤其是在促进动物生长发育方面运用较为普遍，但过度使用容易引发负面影响。采用液相色谱法检测动物饲料中的醋酸氯地黄体酮具的含量是确保动物饲料安全性的基础，本文基于实验分析以探究该方法的检测效果。

液相色谱法 动物饲料 醋酸氯地黄体酮

1 醋酸氯地黄体酮概述

醋酸氯地黄体酮是一种白色或类白色结晶性的粉末，结构式C23H29ClO4，一般较易溶于甲醇而不溶于水。醋酸氯地黄体酮用处较为广泛，对于人体主要用于避孕之用；对于牲畜，主要用于催长剂之用，但是长期使用会导致负面影响，危害健康。根据我国《动物性食品中兽药最高残留限量》文件中的相关规定，在动物的饮食品种严禁添加醋酸甲黄体酮而且最高残留不得高于1µg/ kg。同时，由于醋酸氯地黄体酮溶性强且一般用量较小，增加了检测的难度。如果检测方法选用不当，则难以有效的检测出动物饮食品中的醋酸氯地黄体酮残留，进而会危害到动物的健康生长，也正是由此决定了针对醋酸氯地黄体酮的检测必须要选用灵敏度高的检测方法。目前，用于检测醋酸氯地黄体酮的方法主要有ELISA法与气相色谱，两者各局。ELISA法具有操作难度与高灵敏度的优势但是因交叉反应的不足，使之仅仅用于样品的初次检测之用；气相色谱——质谱法存在灵敏度低而主要针对样品的衍生检测所用；高效液相色谱法则兼备上述检测方法的优势，使之在动物食品检测中得以广泛的运用。由于醋酸氯地黄体酮具有极强的溶性与紫外吸收性能，更为适宜采用高效液相色谱法检测法。

2 醋酸氯地黄体酮的检测方法分析

2.1 试验试剂

所采用的试剂为分析纯试剂，特殊标明者除外；实验用水均为GB/T6682标准的一级水。甲醇：色谱纯；复溶液：40%乙腈水溶液；淋洗液：40%甲醇水溶液；醋酸氯地黄体酮对照品：纯度大于98.5%；醋酸氯地黄体酮标准储备液：1 mg/ml的标准储备液；HLB固相萃取柱：200mg/6 ml（或相当规格）；微孔滤头：0.45 µm。

2.2 仪器与设备

实验过程中需要用到以下仪器与设备：高效液相色谱、离心机、天平、涡旋振荡器、固相萃取装置。

2.3 试验方法

根据GB /T 14699.1的规定进行取样，再采用四分法进行缩减，控制为200g左右；根据GB/T20195的规定进行样品的制备，先将样品粉碎再采用分析筛（0.45mm孔径）筛出，装瓶以备使用。

2.3.1 提取

称取2.0g配合饲料（精确到0.05 g），至50ml塑料离心管中，加入10ml乙腈，涡旋震荡10min8000 r/min离心5min，取上清液。残留物用10 ml乙腈重复提取1次，合并上清液，50℃下氮气吹干至约2ml，加入4ml水充分溶解作为备用液。

2.3.2 净化

HLB固相萃取小柱依次用甲醇和水各5mL活化，取全部备用液过柱，依次用水和淋洗液各5mL淋洗，抽干，用6ml乙腈洗脱，洗脱液50℃下氮气吹干，残余物用2 ml流动相溶解，涡旋溶解，过0.45µm滤膜，供高效液相色谱仪测定。

2.3.3 标准曲线的制备

精密量取适量醋酸氯地黄体酮储备液，流动相稀释成0.2，1，5，20，50和100µg/ml的各系列对照溶液，供测定，以色谱峰面积为纵坐标，对照溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.3.4 色谱参考条件

色谱柱：ASB-C18柱（250 mm×4.6 mm，粒径5µm）；柱温：室温；进样量：20µl；流动相：乙月奋水=53：47；流速：1.0 mL/min；紫外检测器：检测波长285nm。

2.3.5 测定方法

检测仪器设备，使之在各项性能处于最佳的状态下运行，进而将对照品与样品相互交替进样。纵坐标的值采用与测试样品质量浓度接近的单点标准溶液外标法定量或以标准溶液中被测组分峰面积与样品溶液中被测组分峰面积的比值，横坐标的值为相应被测组分质量浓度，进而根据纵横坐标的值绘制出工作曲线以进一步对样品加以定量。

3 结果与分析

3.1 试用范围及检测限

结合以往工作经验，在各类动物饲料中醋酸氯地黄体酮的监测适宜采用液相色谱法。具体检测方法的执行需要注意以下几点：其一，适用于检测含量为1 mg/kg，定量限为0.2 mg/kg的样品；其二，可采用GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法；GB/T14699.1饲料采样；GB/T20195动物饲料试样的制备；其三，该方法的运用是在严格遵循国家相关文件的规定下编写的，主要参照了《GB/T 1.1-2009标准化工作导则第一部分》、GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》等文件。在整个检测方法的运用过程中，尽力做到引用技术科学规范、方法编写的用词准确，无歧义或错误，同时用词要简单易懂、内容编写要符合相关规范等。

3.2 液相色谱法在检测饲料中醋酸氯地黄体酮的方法设计分析

在实验过程中查阅了国内外相关著作文献，综合文献的研究可以得知其主要的研究方向在于醋酸氯地黄体酮的在兽药制作过程中的使用量以及可供检测的方法，其中检测方法是多样化的，如常见额RIA法、ELISA法、液相色谱法等，但是采用液相色谱法以检测动物饲料中醋酸氯地黄体酮含量的较少。本文基于研究醋酸氯地黄体酮相关科学知识以及综合国内外文献研究的基础之上，运用现有的仪器设备等条件，采用了采用液相色谱法以检测动物饲料中醋酸氯地黄体酮含量以探究该方法在动物饲料醋酸氯地黄体酮含量检测中的效用。根据实验发现，采用该方法进行检测不进操作简易而且灵敏度与精确度均较高，实验数据较为客观，适合用于动物饲料中醋酸氯地黄体酮含量的监测。

[1] 贾涛.应用高效液相色谱技术检测饲料中的醋酸氯地黄体酮[J].饲料广角，2014，（11）：32-35.

[2] 刘红菊，闫冲.反相高效液相色谱法同时测定饲料中的10种性激素[J].中国饲料，2010，（18）：34-36.

尹原妍（1983-），江苏句容人，研究方向：饲料检测。