（广州市动物卫生监督所，广东广州 510440）

广州市农贸市场家禽生鲜上市政策实施效果评估

郑丽兰，张海冰，陈 裕，杨穗娟，钟锦辉，林 鸿，殷 实，张海明，彭 聪，曾佳臻，胡永辉，张 桢，邝惠仪，陈裕华，林钟婷，邓小敏，杨秋菲，钟卓玲，沈 丹

（广州市动物卫生监督所，广东广州 510440）

为评价广州市家禽“集中屠宰、冷链配送、生鲜上市”的实施效果，为下一步调整禽流感综合防控措施提出科学依据，2016年3—4月对广州市限制活禽销售区域和非限制活禽销售区域内的各11个农贸市场进行调查研究。调查共采集496份市场内、外环境棉拭子进行A型和H9亚型流感病毒荧光RT-PCR检测。结果发现：限售区与非限售区农贸市场环境样品的A型流感病毒阳性率分别为81.06%和89.22%，差异显著（p<0.05）；H9亚型流感病毒的阳性率分别为25.55%和43.12%，差异极显著（p<0.01）；外环境样品中，限制区的地面擦拭标本禽流感阳性率为54.55%，而非限制区的阳性率则高达100%，差异显著（p<0.05）；内环境样品中的污水和档口地面两个采样点样品的H9亚型病毒阳性率在限制区和非限制区之间差异显著（p<0.05）。本次调查结果显示，广州市采取的“限制活禽交易、生鲜上市”措施，对于禽流感防控起到了一定的积极作用，但仍存在一些不足需要改善，建议严格实施集中屠宰、冷链配送等措施。

禽流感；活禽市场；生鲜上市；效果评估

2013年2月始，我国浙江、江苏、广东等十多个省份相继发生人感染H7N9亚型流感病毒事件[1-2]。同年5月18日，广州市某区也发现了H7N9亚型流感病毒。截至2014年2月13日，广东省共报告了逾40例人H7N9感染病例。随后国内外科学家研究发现：我国新出现的H7N9病毒是一种多宿主多次重配的新型病毒。为维护公共卫生安全，降低人感染H7N9流感的风险，促进家禽生产经营业转型升级，广州市于2014年5月至11月在部分区域开展了家禽“集中屠宰、冷链配送、生鲜上市”的先行试点工作，基本形成了一套符合广州市本地实际情况的家禽生鲜上市模式。

为评价广州市家禽“集中屠宰、冷链配送、生鲜上市”政策的实施效果，2016年3月至4月，本课题组对广州市限制活禽销售区域（以下简称限制区）和非限制活禽销售区域（以下简称非限制区）的禽流感病毒污染情况进行了调查研究。由于H9亚型流感病毒与H7N9亚型流感病毒的密切相关性，所以选择通用型禽流感和H9亚型禽流感作为此次农贸市场家禽生鲜上市政策效果评估的指标。

1 方法

1.1 确定研究对象及抽样原则

广州市划定的限制区内共有208家农贸市场，非限制区内共有241家农贸市场。本调查在限制区与非限制区分别选取11个农贸市场进行研究。

1.2 样品选择

采集所选农贸市场内各档口的内外环境样品，尽量兼顾每个档口，采集位置优先选择可能残留禽流感病毒的地方。档口内外环境样品需采集潮湿和脏的样品。档口内环境棉拭子的采集顺序依次为档口销售台、档口污水、档口地面、案板、笼具表面。档口外环境棉拭子的采集顺序依次为垃圾箱内壁、下水道、地面污水、地面擦试标本、运输车辆。采集时需1份/管，在管上标明样品种类（如饮水）并进行唯一性编号。

1.3 样品数量

在非限制区采集样品269份，在限制区采样227份，共采集496份棉拭子样品。

1.4 检测试剂与方法

通用型流感病毒（AIV）和H9亚型流感病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒均购自中山达安基因股份有限公司；RNA提取试剂购自美国应用生物有限公司。

用RNA提取试剂盒提取所采集样品的禽流感病毒核酸。根据各检测项目的RT-PCR试剂盒方法，分别用ABI7500实时荧光核酸扩增仪进行核酸扩增。首先对采集的样品进行通用型流感病毒检测，再对阳性样品进行H9亚型流感病毒检测。

1.5 统计学分析

采用SSPS 20统计软件和EXCEL软件对调查结果进行数据统计和分析；阳性率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 限制区与非限制区通用型流感病毒及H9亚型流感病毒阳性率比较

通用型流感病毒和H9亚型流感病毒阳性率在限制区和非限制区之间存在差异，具有统计学意义（表1）。

表1 限制区与非限制区样品的AIV阳性率比较

2.2 限制区和非限制区不同采样点样品的AIV核酸检测结果比较

虽然通用型流感病毒在限制区和非限制区内各采样点的阳性率有所差别，但是差异不明显（P>0.05）。外环境样品中，限制区地面擦拭标本的阳性率为54.55%，非限制区的阳性率为100%，差异显著（χ2=4.14，p<0.05）；其他采样点外环境样品之间的差异都不明显（P>0.05），具体见表2。

表2 限制区和非限制区不同采样点样品的AIV核酸检测结果

2.3 限制区和非限制区不同采样点样品的H9亚型流感病核酸检测结果比较

比较限制区和非限制区样品的H9亚型病毒阳性率，发现限制区内环境样品的阳性率比非限制区低；内环境样品中的污水和档口地面样品阳性率在限制区和非限制区之间差异显著（p<0.05）。外环境样品之间的差异都不明显（P>0.05），具体见表3。

表3 限制区和非限制区不同采样点样品的H9亚型流感病核酸检测结果

3 讨论

2013年3月，上海和安徽两地首先发现3例人感染新型重配H7N9亚型流感病毒的病例。随后，国内外科学家研究发现，我国出现的H7N9病毒是一种多宿主多次重配的新型病毒[2]。其中，H7N9病毒编码定位于囊膜内蛋白的6个基因节段（PB2､PB1､PA､NP､M 和NS）全部来源于多年来流行于我国家禽中的H9N2病毒。新型H7N9病毒继承了母源病毒（H9N2）变异迅速、基因复杂的特点，通过不断地基因重配获得了感染人的能力[1]。由此可见，H9亚型中的H9N2病毒，在新型H7N9病毒的产生并获得传染人能力中扮演着重要角色，或许它还将继续参与H7N9病毒的变异。因此，此次调查选择了H9亚型禽流感病毒作为一个评估指标，同时为防止漏检，还选择了通用型流感病毒作为指标。

农贸市场是不同来源、不同批次、不同种类禽类的聚集地，其给病毒传播扩展提供了优良的环境条件。目前的研究认为，活禽交易市场是禽流感病毒的重要存储库，是人感染H7N9等流感病毒的高风险区域[3-4]。彭聪及钟锦辉等[5-6]分别通过对广州市活禽交易市场休市及“零存栏”政策进行效果评估发现，单纯依靠每月一次的休市措施或活禽零售市场“零存栏”措施，无法从根本上降低活禽交易市场内禽流感的污染率以及人感染禽流感的风险，由此提出了“家禽生鲜上市”的研究设想并实施。

本次调查研究是“休市”及“零存栏”研究的延续。本调查从广州市划定的限制区与非限制区内各选取11个农贸市场，分别采集市场外环境和内环境样品进行通用型流感和H9亚型流感的病毒检测，结果发现限制区内的通用型流感病毒污染严重程度明显比非限制区低，这与陈兵等[7]的研究结论基本一致。可见针对活禽交易市场采取“家禽生鲜上市”的措施能在一定程度上降低农贸市场内禽流感病毒的污染程度，这也与上海、浙江以及香港等地的禽流感防控成功经验相符合。但与此同时，本调查也发现限制区环境样品中禽流感病毒并没有完全消失。调查发现目前市场上的冰鲜家禽有三种类型：第一类是去内脏的冰鲜禽类，主要来自广州市周边的经检疫合格的家禽屠宰场；第二类是去除内脏的完整家禽，其是在市场附近租一个地方屠宰，然后运到市场内售卖的；第三类是整只家禽只放血、脱毛，没有去内脏（又叫“杀白”），然后运入市场进行售卖，售卖时根据客户要求再去除内脏，其来源基本与第二类相同。第二类和第三类冰鲜禽类的存在，可能是导致限制区内环境样品禽流感病毒阳性率依旧较高的主要原因之一。特别是第三种情况的存在，能在相当程度上解释限制区内环境中的销售台和笼具表面样品的AIV阳性率高于非限制区的原因。同时，由于第二类、第三类禽的屠宰点就在市场附近，很多时候市场外的垃圾箱就成了屠宰点丢弃废物的地方，从而导致限制区外环境样品中垃圾箱内壁样品的AIV和H9亚型流感的阳性率甚至比非限制区的还要高。由此推测“家禽生鲜上市”实施效果的好坏，关键还在具体实施过程中各环节和细节的有效监督管理上。如果能够有效控制家禽的非法运输和屠宰，杜绝第二类、第三类家禽的出现，相信能够更好地控制禽流感的发生和扩散。

比较内外环境各采样点样品的AIV阳性情况发现，仅有限制区地面檫拭标本的阳性率显著低于非限制区，而其他采样点的阳性率差别则不显著。同样，比较各采样点H9亚型流感的阳性情况发现，仅有限制区污水和档口地面样品的阳性率显著低于非限制区，而其他采样点的阳性率差别不明显。这可能与在各个采样点采集的样本量不足，不便于统计分析有关。例如，关于运输车辆的样品，总共采集了6份。建议下次研究最好适度扩大各采样点的样本量。

本研究提示，广州市采取的设置活禽销售限制区、推行活禽市场家禽生鲜上市的措施总体上是比较有效的，但依旧存在问题。应进一步加强“集中屠宰、冷链配送”措施的执行和监督管理，切实降低禽流感的发生风险以及人感染禽流感的风险。

[1] LAM T T，WANG J，SHEN Y，et al. The genesis and source of the H7N9 infuenza viruses causing human infections in China[J]. Nature，2013，502（7470）：241-244.

[2] CUI L，LIU D，SHI W，et al. Dynamic reassortments and genetic heterogeneity of the human-infecting infuenza A（H7N9）virus[J]. Nat Commun，2014，5：3142.

[3] WANG M，DI B，ZHOU D H，et al. Food markets with live birds as source of avian infuenza[J]. Emerg Infect Dis，2006，12（11）：1773-1775.

[4] BAO C J，CUI L B，ZHOU M H，et al. Live animal markets and infuenza A（H7N9）virus infection[J]. N Engl J Med，2013，368（24）：2337-2339.

[5] 彭聪，彭南秀，段晓冬，等. 广州市活禽交易市场休市效果评估列队研究[J]. 中国动物检疫，2016，33（8）：3-7.

[6]钟锦辉，彭聪，彭南秀，等. 基于禽流感病毒检测的活禽零售市场“零存栏”效果评估[J].中国动物检疫，2016，33（8）：13-16.

[7] 陈兵，马智超，余光清，等. 宝安区2013-2014年人感染H7N9禽流感公共卫生风险评估[J]. 中国公共卫生管理，2015，31（5）：613-615.

（责任编辑：朱迪国）

Effect Evaluation on the Implementation of Fresh Poultry Meat Marketing Policy in the Retail Live Bird Markets in Guangzhou City

Zheng Lilan，Zhang Haibing，Chen Yu，Yang Suijuan，Zhong Jinhui，Lin Hong，Yin Shi，Zhang Haiming，Peng Cong，Zeng Jiazhen，Hu Yonghui，Zhang Zhen，Kuang Huiyi，Chen Yuhua，Lin Zhongting，Deng Xiaomin，Yang Qiufei，Zhong Zhuoling，Shen Dan
（Guangzhou Animal Health Inspection Institution，Guangzhou，Guangdong 510440）

In order to evaluate the implementation effect of the“centralized slaughtering，cold chain distribution，fresh poultry meat listing and marketing”system in Guangzhou City，so as to provide scientifc basis for adjusting the comprehensive prevention and control measures for avian influenza（AI），an investigation was conducted in regions both limiting and allowing live-bird marketing（11 live-bird markets were selected on behalf of each type of the regions，respectively）during March to April，2016. Altogether 496 cotton swabs were collected from internal and external market environment and detected by fluorescent RT-PCR for avian influenza virus type A and subtype H9. Results showed that in the restricted and non-restricted regions，the positive rates of avian infuenza type A were 81.06% and 89.22% respectively，which showed a significant difference（p<0.01）. And that of avian influenza subtype H9 were 25.55% and 43.12% respectively，existing a highly signifcant difference（p<0.01）. Meanwhile，among the wipe samples of ground surface derived from external environment of restricted region，the positive rate of AI was 54.55%，while that in non-restricted region was 100%，still showing a signifcant difference. Moreover，in internal environment，obvious difference was also found in samples from sewage and stall ground surface betweenrestricted and non-restricted regions. These results indicated that the adopted measures of restricting live bird marketing and fresh poultry meat listing and marketing had played a certain positive role in AI prevention and control. However，there still exist some problems needing to be improved，and corresponding suggestions were given，such as strictly implementing measures of centralized slaughtering and cold chain distribution，etc.

avian infuenza；live bird market；fresh poultry listing and marketing；effect evaluation

book=4,ebook=10

S858.21

B

1005-944X（2017）01-0004-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.01.002

科技部科技基础性工作专项（2012FY111000）；广东省农业厅H7N9流感联合攻关项目（粤农函〔2014〕1046号）；广东省省级科技计划项目“H7N9亚型禽流感诊断方法和综合防控技术研究”（2013B020224004）

沈 丹