聂 昂，王婕敏，张居作，蔡文杰，袁安文※，薛立群※

（1.湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131）

PRV定量PCR检测方法的建立及其在猪精液检测中的初步应用

聂 昂1，王婕敏1，张居作1，蔡文杰2，袁安文1※，薛立群1※

（1.湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131）

文章根据PRV基因序列，设计特异性引物扩增gH基因，构建重组质粒；优化实验条件，建立PRV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果表明该方法的标准曲线线性关系良好，R 2=0.998，E=103.854％；特异性强，检测猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环2型病毒、猪乙脑病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗等均无扩增曲线；灵敏度高，最低可检测到的27.9拷贝；在公猪精液中最低可检测到病毒量为16TCID50/100μL，可重复验证，变异系数均低于3.5％；利用该方法对湖南省109份公猪精液样品进行了检测，发现20份阳性样品，阳性率为18.35％，比国标普通PCR法检出率高。该方法的建立将为PRV的流行病学调查提供可靠的技术支持。

PRV；荧光定量PCR；公猪精液；流行病学

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型，是危害养猪业的主要病原之一，主要引起仔猪死亡，母猪繁殖障碍（早产，流产，死胎，木乃伊胎）；而成年猪多为潜伏感染[1]。猪伪狂犬病毒可以在猪群中水平传播，也能够通过公猪精液垂直传播[2,3]。随着人工授精技术在养猪业的推广使用，病毒在猪群中的广泛传播的风险增加。为了掌握公猪精液中携带伪狂犬病毒的情况，有必要建立一种能够在公猪精液中检测出猪伪狂犬病毒的方法。……