袁托亚，刘晓宇，王悦喜



内蒙古地区蒙古族人群ABCA1基因69C/T多态性分布特点及其与血脂和冠心病的关系

袁托亚，刘晓宇，王悦喜

目的 探讨ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)基因69C/T单核苷酸多态性在内蒙古地区蒙古族人群中的分布特以及其与血脂和冠心病的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性方法检测101例蒙古族冠心病病人和102名正常对照组ABCA1基因相应片段的多态性。结果 ABCA1基因69C/T TT基因型和T等位基因频率在冠心病组均显著高于正常对照组(P<0.05)；经相对危险度分析TT基因型的相对危险度OR=2.698，95%CI为1.408～5.170，P<0.05，说明TT基因型是冠心病的危险因素。ABCA1基因69C/T TT、TC、CC三种基因各基因型高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ABCA1基因69C/T多态性与内蒙古地区蒙古族冠心病病人的遗传易感性相关，TT基因型病人增加冠心病的危险性。

冠心病；三磷酸腺苷结合盒转运子A1；基因多态性；血脂

随着基因组酶切和测序的进展，从分子遗传学角度研究冠心病病因已成为可能，这将为冠心病的预防 和治疗提供新的途径。ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)是ATP结合盒转运子(ATP binding cassette transporter，ABC)超家族的成员，如果ABCA1基因突变，使胆固醇外流障碍[1]，胆固醇和胆固醇脂在巨噬细胞内积聚而成为泡沫细胞，继而浸润血管壁，促进动脉粥样硬化和冠心病的发生发展。目前，尚未见ABCA1基因69C/T多态性在蒙古族中的相关报道，本研究对203例蒙古族受试者进行了ABCA1 69C/T基因变异检测和血脂检测，以探讨这种基因变异与冠心病的关系及其对血脂的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象 研究对象均为蒙古地区蒙古族人群。选择2008年12月—2016年3月我院心内科行冠状动脉造影阳性(至少1支冠状动脉直径狭窄≥50%)，并根据1979年世界卫生组织(WHO)冠心病标准诊断为冠心病的病人101例(冠心病组)，年龄(59.4±11.7)岁；正常对照组102名，年龄(58.3±12.8)岁。经询问病史、体检、实验室检查(血、尿、便常规，血脂，血糖，肝、肾功能)、心电图、胸片、心脏彩超、心肌灌注发射型计算机断层扫描(ECT)显像、64排冠状动脉CT、冠状动脉造影等检查确诊为冠心病。通过问卷访谈收集研究对象的基本资料、家族史、既往史、吸烟和饮酒史等。吸烟史的标准为过去1年或1年以上每天吸烟10支以上。剔除标准：风湿性疾病、大动脉炎、血液病、结核、肿瘤、严重肝肾功能不全等。

1.2 方法

1.2.1 血脂水平的检测 所有化验检查均采用次日清晨空腹采取静脉血3 mL，分离血清测定血脂水平，三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)以氧化酶法测定，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用PEG变构酶法测定，试剂均为Leadman公司生产。仪器为日本OLYMPUS AU 600全自动生化分析仪。

1.2.2 DNA提取 用EDTA抗凝真空采血管采集外周静脉血3 mL，置于-80 ℃保存备用。按照血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒的说明提取血液DNA(由TIANGEN公司提供)。

1.2.3 设计引物 设计PCR引物，引物由Sangon公司合成，上游引物：5′GGCTTTGACCGATAGTAACCT 3′，下游引物：5′CTCTTTCTCCTACCCCTTGAC 3′。

1.2.4 ABCA1基因多态片段的PCR扩增 PCR反应在PTC-200型循环仪中进行。PCR 反应体系50 μL，包括：2×Taq PCR MasterMix (由TIANGEN公司提供)25 μL，DNA 2.0 μL，上游和下游引物分别1.0 μL(10 μmoL)，灭菌超纯水21 μL。PCR反应条件：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s、53 ℃退火30 s、72 ℃延伸40 s，共25个循环；72 ℃终末延伸5 min。

1.2.5 PCR产物的酶切消化 酶切反应体系20 μL：PCR产物10 μL，BsmA I内切酶(由Fermantas公司提供)0.4 μL，10×Buffer 2.0 μL，灭菌超纯水7.6 μL，置于37 ℃酶切16 h。取酶切产物在2%琼脂糖凝胶中电泳检测并确定样品基因型。DNA Marker为BioMarkerⅠ(由BioFluk公司提供)。

2 结 果

2.1 冠心病组与正常对照组一般资料比较 冠心病组与对照组年龄分布差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。对冠心病组和对照组的基因型分布进行了平衡检验，χ2检验表明两种基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，具有群体代表性。

2.2 69C/T各基因型和等位基因分布(见表1) 冠心病组TT型和T等位基因频率均明显高于正常对照组(P<0.05)，CC型和C等位基因分布频率均明显低于正常对照组(P<0.05)。经相对危险度分析TT基 因型的相对危险度OR=2.698，95%CI为1.408～5.170，P<0.05，这说明蒙古族TT基因型个体增加冠心病的患病危险。

表1 蒙古族69C/T基因型及等位基因分布 例(%)

2.3 蒙古族69C/T三种基因型血脂比较(见表2) 蒙古族人群CC、TC、TT三种基因型HDL-C、LDL-C、TG、TC比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

表2 蒙古族族69C/T三种 基因型血脂比较 (±s) mmol/L

2.4 69C/T基因PCR产物及酶切电泳图(见图1、图2)

注：M为50bp DNA Ladder (标记物)，1、2、3、4、5、6为177bp的PCR产物。

图1 包含69C/T位点PCR产物2.0%琼脂糖凝胶电泳结果

注：M为100bp DNA Ladder(标记物)。

图2 69C/T酶切产物及marker电泳图

3 讨 论

在普通人群中，基因变异最常见的方式是单核苷酸多态性，单核苷酸多态性系指人类基因组中大量存在的单个核苷酸的差异，它是一种DNA变异，包括缺失、插入、置换、颠换、移码、错义等类型，占全部基因组DNA变异的90%左右。核苷酸序列的一定差异决定了不同人种和不同个体的差异，以及不同人群疾病易感性和对药物治疗敏感性的差异。目前人们越来越关注正常人、冠心病人群中的ABCA1基因多态性与血脂、冠心病的关系，ABCA1基因中一些常见的多态性与血脂水平、动脉粥样硬化和冠心病的发病年龄及严重程度明显相关[2]。有些变异因其ABCA1功能障碍使血浆HDL-C水平降低，冠心病的危险性明显增加，如R230C 、R1587K、V825I[3-4]。有些变异使HDL-C水平增高[5]，具有抗动脉粥样硬化和降低冠心病危险性的作用，如R219K[6]。而在启动子区的单核苷酸多态性增加冠心病的危险性，如C69T[7]。但其对血脂改变没有影响。

Versmissen等[7]研究结果表明在启动子区69C/T基因TT型基因病人患冠心病的风险是CC型的1.7倍，这与本研究结果基本一致。本研究重点分析内蒙古地区蒙古族ABCA1 69C/T基因，通过聚合酶链反应-限制片段长度多态性方法(PCR- RFLP)检测蒙古族ABCA1 69C/T多态性，冠心病组TT型频率明显高于正常对照组，而CC型频率明显低于正常对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。经相对危险度分析TT基因型的相对危险度OR=2.698，95%CI为1.408～5.170，P<0.05，这说明蒙古族人群TT基因型个体增加冠心病的患病危险。而各基因型与血脂的相关研究表明：各基因型病人血脂改变差异无统计学意义(P>0.05)。根据以上结果，推测其原因可能为TT基因型是在不影响血脂情况下增加冠心病的发生率及患病风险，其机制是通过影响胆固醇的逆向转运过程但不影响血脂水平而实现的。

总之，本研究结果初步显示蒙古族ABCA1基因中69C/T TT基因型是冠心病的危险因素。但冠心病是一个受多基因、多因素影响的疾病，冠心病的危险因素还包括不同基因(同时存在其他基因位点改变或调控基因的影响)、民族、年龄、饮食、高血压、糖尿病、吸烟史、家族史等，具体机制还需要进一步的大样本研究工作来明确。

[1] Kyriakou T，Pontefract DE，Viturro E，et al.Functional poly-morphism in ABCA1 influences age of symptom onset in coronary artery disease patients[J].Hum Mol Genet，2007，16(12)：1412-1422.

[2] Kyriakou T，Pontefract DE，Viturro E，et al.Functional polymorphism in ABCA1 influences age of symptom onset in coronary artery disease patients[J].Hum Mol Genet，2007，16 (12)：1412-1422.

[4] Cao XL，Yin RX，Wu DF，et al.Genetic variant of V825I in the ATP-binding cassette transporter A1 gene and serum lipid levels in the Guangxi Bai Ku Yao and Han populations[J].Lipids Health Dis，2011，19(1)：10-14.

[5] Jing Z，Zhou R，Xu C，et al.Genetic variation of ATP-binding cassete transporter A1 and susceptibility to coronary heart disease[J].Mol Genet Metab，2011，103(1)：81-88.

[6] Li Y，Tang K，Zhou K.Study on the association of ABCA1 gene common variants with the risk of coronary atherosclerotic heart disease[J].Molecular Biology Reports，2012，39(2)：1809-1813.

[7] Versmissen J，Oosterveer DM，Yazdanpanah M，et al.A frequent variant in the ABCA1 gene is associated with increased coronary heart disease risk and a better response to statin treatment in familial hypercholesterolemia patients[J].Eur Heart J，2011，32(4)：469-475.

(本文编辑郭怀印)

Detection of Polymorphism of ABCA1 Gene 69C/T and Its Association with Blood Lipids Level and Coronary Heart Disease in Mongolian Population

Yuan Tuoya，Liu Xiaoyu，Wang Yuexi

The Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Huhhot 010050， Inner Mongolia，China

Liu Xiaoyu

Objective To investigate whether ATP-binding cassette transporter A1(ABCA1) gene 69C/T single nucleotide polymorphisms variation was correlated with coronary heart disease(CHD) in Mongolian population of the Inner Mongolia region，and the association of this polymorphism with blood lipids. Methods The target fragments of ABCA1 gene was amplified and analyzed by polymerase chain reaction(PCR)-restriction fragments length polymorphism(RFLP) technique in 203 Mongolian patients with CHD and Mongolian control subjects without CHD. Results The frequency of TT genotype and T allele of ABCA1 69C/T gene was all significantly higher in CHD patients than that in controls(P<0.05). TT genotype adds ratio was 2.698 (95% CI：1.408 to 5.170，P<0.05).It showed that TT genotype was risk factorsfor CHD accidents by relative risk analysis. There was no significant difference in the levels of high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C)，low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C)，cholesterol (TC)， triglycerides (TG) among three genotype of 69C/T (TT，TC，CC) gene (P>0.05).Conclusion ABCA1 gene 69C/T and polymorphism is associated with CHD risk in Mongolian population of the Inner Mongolia region.The TT genotype of the ABCA1 gene C69T polymorphism is associated with increased CHD risk.

coronary heart disease；ATP-binding cassette transporter A1；polymorphism；blood lipids

内蒙古自然科学基金(No.2013MS1131)

内蒙古医科大学附属医院(呼和浩特 010050)

刘晓宇，E-mail：p84zjj@163.com

R541.4 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.22.002

1672-1349(2016)22-2597-04

2016-03-21)

引用信息：袁托亚，刘晓宇，王悦喜.内蒙古地区蒙古族人群ABCA1基因69C/T多态性分布特点及其与血脂和冠心病的关系[J].中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(22)：2597-2600.