吴浩

基因工程操作的核心是构建基因表达载体，围绕表达载体的考题有逐年增多的趋势。下面从不同的角度对表达载体进行解读。

一、基因表达载体的一般结构及各部分的功能

如上图，基因表达载体一般由目的基因（插入基因）、启动子、终止子、标记基因（抗生素抗性基因）等结构组成。

启动子是复制原点附近的一段有特殊结构的DNA，位于基因的首端。启动子和特定的物质（如激素）作用后，通过一系列复杂的正反馈机制，激活复制原点（复制原点通常与某些酶结合）。

终止子位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA。终止子相当于一盏红色信号灯，使转录或复制在所需要的地方停止下来。

复制原点处的A和T特别多，氢键相对较少，不稳定，DNA容易解旋，因此易与引物结合，成为转录的起点或复制的起点。

抗生素抗性基因作为标记基因，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。标记基因又称报告基因，抗生素抗性基因是其中的一种。

二、基因表达载体中启动子、终止子的来源及特点

（1）如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，在构建基因表达载体时，不需要在质粒上目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子，因为目的基因中已含有启动子、终止子。（2）如果目的基因是通过人工方法合成的，或通过cDNA文库获得的，则目的基因是不含启动子和终止子的。若只将基因的编码序列导入受体细胞，目的基因没有启动子、终止子，是无法转录或复制的，因此，在构建基因表达载体时，在与质粒结合之前，需要在目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子。……