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(1.广州医科大学附属第四医院妇产科,广东 广州511447;2.南华大学护理学院)

·妇产科疾病专题·

妊娠期糖尿病产妇胎盘与血清脂联素水平的相关性

李华珍1,袁俏奇1,罗利1,黄薇1,许金华2*

(1.广州医科大学附属第四医院妇产科,广东 广州511447;2.南华大学护理学院)

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)产妇胎盘脂联素(APN)表达水平与血清脂联素、胰岛素抵抗的关系。方法选择2014年10月至2015年9月在本院分娩的30例GDM产妇作为研究组，随机抽取同时段分娩的正常产妇30例作为对照组。免疫组化法检测胎盘滋养层细胞APN表达水平，分析胎盘APN水平与胰岛素抵抗、血清APN水平、产前体重指数(BMI)、新生儿体重和身长的相关性。结果对照组胎盘滋养层细胞中可见细胞质、胞核或胞膜被染成棕黄色的阳性反应物，研究组阳性反应物的表达弱于对照组。定量分析显示，对照组APN的表达量为62.54±3.36，研究组APN的表达量为37.12±2.79，两组比较，差异有显著性(t=8.496,P=0.000)。胎盘滋养层APN水平与产前BMI、产前HOMA-IR、新生儿出生体重呈负相关(P<0.01)，胎盘滋养层APN水平与产前血APN水平呈正相关(P<0.01)，而与新生儿出生身长无相关性(P>0.05)。结论胎盘APN表达水平降低和孕妇血清APN水平、胰岛素抵抗与胎儿生长发育均有显著相关，对胎盘APN表达及作用机制的进一步研究可为GDM的防治提供新的思路。

妊娠期糖尿病； 脂联素； 胎盘

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GMD)指孕前无糖尿病，妊娠期首次识别或发生的糖尿病或糖耐量异常[1]，妊娠期糖尿病可能导致羊水过多、早产、死胎等多种并发症，对围产期母婴安全危害较大。脂联素(adiponectin，APN)是由脂肪细胞分泌的多肽类激素，与胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生有着明显的相关[2]。研究显示，GDM和糖耐量受损孕妇血清APN水平明显低于正常孕妇[3]。目前对胎盘脂联素表达与GDM关系报道较少，本文对GDM和正常孕妇胎盘脂联素蛋白水平的表达进行研究，探讨胎盘脂联素水平与血清脂联素水平的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2014年10月～2015年9月在本院分娩的30例GDM产妇作为研究组，妊娠期糖尿病诊断标准参照(IAPNSG2010)妇产科第八版教材标准[1]，75 g葡萄糖行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)：空腹血糖≥5.1 mmol/L，1 h≥10.0 mmol/L，2 h≥8.5 mmol/L，任意一点血糖值异常即可诊断为妊娠期糖尿病。随机抽取同时段分娩的正常产妇30例作为对照组。两组患者均排除孕前糖尿病、高血压、甲功异常、妊娠期肝内胆汁淤积症、肝肾功能障碍等内外科病史，排除前置胎盘、胎盘早剥、羊水过少或过多等妊娠期并发症。研究组和对照组的一般情况：观察组(GDM组)产妇年龄20～42岁，平均28.87±2.21岁，孕周37～41周，平均38.14±1.73周，BMI 19.31～39.48，平均31.02±2.21，孕次1～5次，平均2.81±0.21次，产次1～5次，平均1.82±0.31次，对照组(正常组)产妇年龄20～41岁，平均27.76±3.21岁，孕周37～41周，平均39.14±1.53周，BMI 19.01～36.08，平均26.14±1.21，孕次1～5次，平均2.73±0.32次，产次1～5次，平均1.72±0.23次，对两组年龄、孕周、孕次及产次进行比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，BMI差异有统计学意义(P=0.004)。

1.2主要试剂多聚赖氨酸，购自北京北方同正生物发展有限公司；SABC染色试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司；DAB显色试剂盒，购自北京索莱宝科技有限公司；羊抗人脂联素单克隆抗体，购北京西美杰科技有限公司。

1.3研究方法

1.3.1 产前抽取产妇空腹静脉血，采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血浆葡萄糖(FPG)，采用化学发光法测定血清空腹胰岛素水平(Fins)，采用ELISA法测血清APN水平。胰岛素抵抗计算公式(HOMA-IR)为FBG×(Fins×22.5)-1。

1.3.2 免疫组化法测定胎盘APN蛋白 所有产妇胎盘娩出后，用手术刀自胎盘母体面取0.5 cm×1.0 cm×1.0 cm的胎盘组织，采用0.9%氯化钠溶液冲洗后，置入10%中性福尔马林溶液中固定24 h，脱水、透明、浸蜡包埋、切片，恒温箱60 ℃烤片1 h，脱蜡并采用梯度酒精水化，0.3%过氧化氢室温孵育30 min，0.01 mol/L磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗涤5 min×3次，微波修复抗原，复温，0.01 mol/L PBS洗涤5 min×3次，滴加正常山羊血清封闭液，室温下20 min，1∶100稀释羊抗人脂联素抗体，PBS代替羊抗人脂联素抗体作为对照组，4 ℃温度过夜，0.01 mol/L PBS洗涤5 min×3次，加生物素化兔抗山羊IgG，孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗涤5 min，重复3次，滴加SABC(Strept Avidin-Biotin Complex,链霉亲和素-生物素-酶复合物)，孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗涤5 min×4次，DAB(3,3-二氨基苯联胺),显色、苏木素复染，盐酸分色，自来水冲洗，梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。采用显微图像自动分析系统对进行半定量分析，随机选取5个视野/张切片，测定阳性反应部位的平均吸光度。

2 结 果

2.1胎盘APN表达对照组胎盘滋养层细胞中可见细胞质、胞核或胞膜被染成棕黄色的阳性反应物，研究组阳性反应物的表达弱于对照组，见图1。定量分析显示，对照组APN的表达量为62.54±3.36，研究组APN的表达量为37.12±2.79，两组比较，差异有显著性(t=8.496,P=0.000)。

2.2胎盘滋养层APN表达水平与产妇临床资料相关性胎盘滋养层APN水平与产前BMI、产前HOMA-IR、新生儿出生体重呈负相关(P<0.01)，胎盘滋养层APN水平与产前血APN水平呈正相关(P<0.01)，胎盘滋养层APN水平与新生儿出生身长无相关性(P>0.05)。见表1。

图1 两组胎盘滋养层中APN的表达对比(400×)

表1胎盘滋养层APN表达水平与产妇临床资料相关性

妊娠结局各指标脂联素rP产前BMI-0.840.000产前HOMA-IR-0.920.000产前血脂联素水平0.940.000新生儿出生体重-0.610.000新生儿出生身长-0.150.414

3 讨 论

APN是由脂肪组织细胞分泌的特异性激素，可调节炎症反应、增强胰岛素敏感性，APN水平下降或功能不全将会增加胰岛素抵抗，增加妊娠期糖尿病的发生几率[4]。研究显示，胰岛素抵抗的糖尿病患者中血清APN水平明显低于正常对照组，提高APN水平可减轻糖尿病患者的胰岛素抵抗[5-6]。胎盘的主要细胞类型为滋养层细胞，除了参与母胎之间的物质交换外，还可分泌多种因子，调节母体的能量代谢，调控胎儿的生长发育[7]。目前有研究显示，胎盘分泌的瘦素、TNF-α等与GDM患者胰岛素抵抗有关[8-9]。但脂联素在胎盘组织中的表达及表达水平与GDM是否有关目前研究较少。

本文采用免疫组化对胎盘组织脂联素表达进行定位和定量研究，结果显示，滋养层细胞浆内有APN蛋白的明显表达，定量研究显示，GDM产妇滋养层APN的表达量明显低于对照组，该结果提示胎盘滋养层细胞可能是孕期APN的来源之一。直线相关显示，滋养层APN表达水平与产妇产前BMI、HOMA-IR均呈明显负相关，与产妇血清脂联素水平呈明显正相关，结果提示GDM发病过程中，除脂肪细胞分泌APN减少外，胎盘分泌水平下降也是孕妇血清APN水平下降的重要原因，在孕妇体脂增加和高血糖、高胰岛素血症等因素的共同作用下，脂肪组织和胎盘的APN分泌均被抑制，导致血清APN水平下降，胰岛素抵抗增加。本研究结果还显示，滋养层APN表达水平与新生儿体重呈负相关，但和新生儿身长无明显相关，说明GDM孕妇胎盘APN水平表达降低可影响胎儿的生长发育，增加巨大儿的发生率，其详细作用机制尚有待进一步探讨。

综上所述，胎盘是孕妇APN的来源，胎盘APN表达水平降低和孕妇血清APN水平、胰岛素抵抗与胎儿生长发育均有显著相关，对胎盘APN表达及作用机制的进一步研究可为GDM的防治提供新的思路。

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TheRelationshipBetweenthePlacentaandSerumAdiponectinLevelinPatientswithGestationalDiabetesMellitus

LI Huazhen，YUAN Qiaoqi，LUO Li，et al

(TheFourthAffiliatedHospitalofObstetricsandGynecology，GuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou，Guangdong511447，China)

ObjectiveTo study the relationship of placenta adiponectin level with insulin resistance and serum adiponectin level in patients with gestational diabetes mellitus.Methods30 patients in our hospital from October 2014 to September 2015 were selected as study group,and pregnant woman in childbirth at the same time were selected as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression level of APN in trophoblast cells.The relationship of placenta adiponectin level with insulin resistance,serum adiponectin level,prenatal body mass index,weight and length of newborn was analyzed.ResultsPositive reaction in placental trophoblast cells could be observed in the control group,and the expression of the positive reaction in the study group was weaker than that in the control group.The expression amount of APN in control group and study group were (62.54±3.36) and (37.12±2.79) respectively (t=8.496,P=0.000).The trophoblast APN level was negatively correlated with BMI in placenta,prenatal HOMA-IR and neonatal birth weight.The trophoblast APN level was positively correlated with prenatal blood APN level (P<0.01).The trophoblast APN level was not correlated with neonatal birth length (P>0.05).ConclusionThe trophoblast APN level was correlated with prenatal blood APN leve,insulin resistance and fetal growth and development,further studies on expression and mechanism of APN in placenta can provide a new way of thinking for the prevention and treatment of GDM.

adiponectin; placenta; gestational diabetes mellitus

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.004

2016-03-07；

2016-05-05

*通讯作者，E-mail：1738143212@qq.com.

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