江飞飞 林海燕 丁美萍

急性脑梗死患者血小板超微结构及相关参数变化的研究

江飞飞 林海燕 丁美萍

目的钼探讨急性脑梗死患者血小板超微结构及血小板相关参数的表达及意义。方法钼选择发病在6～24h的脑梗死患者30例为实验组，健康体检者30例为对照组，采用透射电镜观察血小板超微结构，比较两组患者之间的差异；采用全自动血细胞分析仪检测血小板平均体积（MPV）、血小板计数（PLT），并对血小板相关参数进行分析。 结果 实验组及对照组的MPV分别为（9.18±0.57）、（8.76±1.32）fl，（P＜0.05），PLT分别为[（173.75±62.18）×109/L]、[（231.86±58.25）×109/L]，（P＜0.05）；透射电镜下，实验组患者血小板形态不规则，伪足增多，多处可见血小板聚集、融合在一起，成片状；血小板膜多处破裂；颗粒明显减少，线粒体肿胀、空泡化。对照组血小板均匀分散存在、呈圆型或椭圆型，血小板膜表面光滑，伪足突起很少，α颗粒和线粒体较多，少有空泡样改变。结论 急性脑梗死患者MPV升高，PLT下降，血小板超微结构显著改变，是导致脑血管急性事件的血小板病理改变基础。

急性脑梗死 血小板 超微结构 血小板平均体积 血小板计数

脑梗死是脑血管疾病的最常见类型，是导致人类死亡的主要疾病之一[1]。脑梗死的发生、发展是一个复杂的病变过程，部分发病机制尚不完全清楚[2]。关于脑梗死患者外周血中血小板活化状态、功能变化的研究已取得了一些进展，但国内外对脑梗死患者血小板超微结构变化这一重要发病机制环节的观察及研究极少[3]。血小板激活是急性脑梗死的一个重要的病理生理过程[4]，血小板被激活后，血小板计数（PLT）和平均血小板体积（MPV）会发生相应改变[5]。本研究通过对急性脑梗死患者及正常人群的血小板超微结构及相关参数进行对比分析，探讨其在脑梗死发生中的相关机制，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2013年1至12月衢州市人民医院住院急性脑梗死患者30例为实验组，男21例，女9例，年龄76～84（77.8±6.7）岁。合并高血压9例，糖尿病4例，高脂血症12例；选取同期健康体检者30例为对照组，男24例，女6例，年龄74～82（76.9±7.4）岁。两组之间性别、年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究经过衢州市人民医院医学研究伦理审查委员会批准，全部观察病例均签署知情同意书。

1.2 脑梗死组入选标准 （1）符合1995年第四届全国脑血管病会议制定的诊断标准，并通过CT或MRI确诊为脑梗死，排除颅内出血患者；（2）急性脑梗死发病6～24h内入院治疗。排除标准：（1）近期内应用过抗血小板药物；（2）房颤、自身免疫性疾病、肝肾疾病及恶性肿瘤患者；（3）发病2周内患感染性疾病或有明显感染迹象者或外周血白细胞（WBC）＞10×109/L。

1.3 PLT、MPV的检测 真空采血管，早晨采集空腹8h静脉血2ml，使用日本东亚公司生产的SYSMEX XE-2100型全自动血细胞分析仪及东亚公司生产的血球稀释液溶血素，严格按照操作规程检测血常规参数，室内质控用东亚公司原装质控品，采用电阻抗法和比色法，质控品与检测标本一起检测。检测PLT、MPV仪器为全自动血细胞分析仪（美国Coulter HMX型）。

1.4 血小板超微结构观察 全部患者均于早晨空腹抽取肘静脉血1.8ml，注入1/10体积2%EDTA-Na2抗凝塑料试管中，混匀；在4℃低温下，标本经1 000r/min离心10min，分离富含血小板的血浆0.5ml，移至锥形离心管中，0.2%戊二醛0.5ml预固定；血浆在低温下，标本经4 000r/min离心15min，弃去上清液，加2.5%戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2～4h。常规锇酸固定，乙醇系列脱水，丙酮置换，Epon812环氧树脂包埋，超薄切机切片，片厚50～60nm，醋酸铀及硝酸铅双重染色。标本制作完成后用日立公司生产的H-7500环境透射电镜真空下，对血小板进行扫描观察，拍摄数码照片。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件，测得计量资料采用表示，两组间均数的比较采用t检验。

2 结果

2.1 急性脑梗死组血小板超微结构的改变 急性脑梗死组患者血小板形态不规则，伪足增多，多处可见血小板聚集、融合在一起，成片状；血小板膜多处破裂；颗粒明显减少（图1）；线粒体肿胀、空泡化。健康对照组血小板均匀分散存在、呈圆型或椭圆型，血小板膜表面光滑，伪足突起很少，α颗粒和线粒体较多，少有空泡样改变（图2）。

图1 实验组血小板超微结构

图2 对照组血小板超微结构

2.2 两组血小板相关参数水平的比较 见表1。

表1 两组血小板相关参数水平的比较

由表1可见，急性脑梗死患者外周血MPV较对照组显著升高（P＜0.05），PLT显著降低（P＜0.05）。

3 讨论

血小板是血液中的重要成分，在维持毛细血管壁的完整性、保持循环稳态中起重要作用，并且参与止血性血栓的形成过程[6]。血液中正常人的血小板基本处于静息状态，而在生理及病理性的血栓前状态、血栓性疾病过程中，因受各种因素的影响，激活而成为活化血小板，一旦发生血小板活化，血小板和纤维蛋白原将聚集成团，引起动脉血栓形成，造成血管闭塞[7]。

脑梗死多在动脉粥样硬化基础上发生，动脉粥祥硬化由于血管壁内皮细胞受损，血管胶原暴露与血小板接触面增加，从而易导致血管内血栓形成，在这一过程中血小板的活化程度起决定作用[8]。在血小板相关参数中，MPV升高，能反映血小板体积增大，而血小板体积增大是血小板活化的间接标志之一[9]；大血小板代谢活跃，黏附能力强，且大血小板含有较多的糖原、腺嘌呤核苷酸、辅酶I和Ⅱ及血小板Ⅲ因子，对凝血酶和胶原的反应增加。血小板被激活并发生变形、黏附、聚集及释放反应[10-11]。因此，大血小板不仅有较强的止血功能，同时也有较强的致栓能力。本研究采用全自动血细胞分析仪对30例急性脑梗死患者及30例健康体检者的MPV、PLT进行了检测分析，结果显示：急性脑梗死患者外周血MPV较正常对照组显著升高，PLT显著降低，MPV增大反映了骨髓巨核细胞增殖活动亢进，血小板转换率增快，功能亢进，MPV增大，含有α颗粒、致密颗粒增多，黏附、聚集功能增强，更易促发脑梗死；脑梗死急性期消耗大量的血小板，因此PLT明显降低；表明MPV、PLT可不同程度反应血小板活性变化，对急性脑梗死的预防和治疗有一定指导作用。

本研究结果表明在脑梗死急性期血小板伪足明显增多，血小板膜多处破裂，大多聚集、融合在一起成片状，血小板α颗粒明显减少，是因为在血小板活化过程中，血小板脱颗粒，α颗粒膜与血小板质膜融合，使原来存在于颗粒膜上的蛋白质暴露在血小板表面，所以在形态上血小板α颗粒明显减少与在功能上血小板黏附率和聚集性均明显增高的改变密切相关。血小板中线粒体显著减少、残留的线粒体大多肿胀、空泡化，这说明血小板处于严重损伤状态，活性物质的大量释放，又进一步加重了血小板的黏附和聚集。Joseph等[12]报道脑梗死急性期血小板α颗粒数、线粒体数目明显减少，血小板分泌的活性物质通过破坏血-脑脊液屏障进入脑组织，从而使病情加重，我们的研究结果支持Joseph等学者的观点。在脑梗死发病机制中,血小板功能增强伴有血小板超微结构的改变，导致血小板黏附和聚集性增强，这可能是导致脑血管机械堵塞的原因之一。

综上所述，急性脑梗死组患者外周血MPV增加，PLT下降，血小板超微结构形态较正常健康体检者有显著的改变，充分证明血小板被激活，是导致脑血管急性事件的血小板病理基础。

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Ultrastructure and blood test indicators of platelets in patients with acute cerebral infarction

JIANG Feifei,LIN Haiyan,DING Meiping.Department of Neurology,Quzhou People's Hospital,Quzhou 324000,China

Objective To observe the platelet ultrastructure and platelet-related parameters in patients with acute cerebral infarction. Methods Thirty patients with infarction of the cerebral median artery admitted within 6～24h after onset(CI group),and 30 healthy adults(control group)were included in the study.Platelet ultrastructure was observed with transmission electron microscopy;the mean platelet volume(MPV)and platelet count(PLT)were determined by automatic blood cell analyzer in both groups. Results The MPV in CI group and control group was(9.18±0.57)fl and (8.76±1.32)fl(P＜0.05);PLT was (173.75±62.18)×109/L and (231.86±58.25)×109/L(P＜0.05).Electron microscopy showed that the ultrastructural changes of platelets was evident with more pseudopodium,aggregation and fusion,more disruption of platelet membrane,fewer alpha granules and also mitochondria,the remains of which demonstrated swell and vacuolization in CI group. Conclusion The results show that MPV is increased and PLT reduced in patients of acute cerebral infarction,and the platelet ultrastructural changes are significant,which may be the pathological basis of acute cerebrovascular events.

Acute cerebral infarctions PlateletUltrastructure Mean platelet volume Platelet count

2014-10-10）

（本文编辑：沈昱平）

324000 衢州市人民医院、浙江中医药大学附属衢州中心医院神经内科（江飞飞、林海燕）；浙江大学医学院附属第二医院神经内科（丁美萍）

丁美萍，E-m ai l：m ei pi ngd@163.com