黄必飞 王超群 赵永明 孙鑫鑫 王倩 陈艳 吴爱姣 曾悦 吴丹丹 王艳

宫颈癌中EGFR蛋白表达及其临床病理意义

黄必飞 王超群 赵永明 孙鑫鑫 王倩 陈艳 吴爱姣 曾悦 吴丹丹 王艳

目的 探讨表皮生长因子受体1（EGFR）蛋白表达在宫颈癌发生、发展中的临床病理意义。方法 采用免疫组化En Vision法检测120例宫颈癌组织、49例高级别上皮内瘤变（CIN2～3）、40例低级别上皮内瘤变（CIN1）、37例正常宫颈组织中EGFR蛋白的表达，并进行比较分析。结果 （1）正常宫颈、CIN1、CIN2～3、宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率分别为10.8%（4/37）、12.5%（5/40）、42.9%（21/49）、89.2%（107/120）。宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率显著高于CIN2～3、CIN1及正常宫颈组织（均P＜0.01）；EGFR蛋白在CIN2～3中表达显著高于CIN1和正常宫颈组织（均P＜0.01）；CIN1和正常宫颈组织之间EGFR蛋白表达阳性率无统计学差异（P＞0.05）。（2）肿瘤浸润深度更深的宫颈癌患者宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率高于浸润深度较浅的患者（P＜0.01）。结论 EGFR在宫颈癌进展过程中起了重要作用，有望成为抗宫颈癌治疗的一个潜在生物学标志。

EGFR 宫颈癌 免疫组化

宫颈癌是我国乃至全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病人数和死亡人数均位于女性恶性肿瘤前列[1]。近年来，虽然抗宫颈癌综合治疗有了新进展，但其仍然是导致中老年女性死亡的重要原因之一。表皮生长因子受体1（EGFR）是促进肿瘤发生、发展的重要因子，在多种肿瘤侵袭和转移过程中发挥了重要作用[2-3]。至今已有较多关于宫颈癌中EGFR蛋白表达的报道，但因评分标准和研究人群的差异，不同研究间EGFR蛋白表达阳性率存在较大差异[4-5]。本研究采用免疫组化En Vision法检测正常宫颈、宫颈低级别上皮内瘤变（CIN1）、宫颈高级别上皮内瘤变（CIN2～3）及宫颈癌组织中EGFR蛋白的表达，以进一步探讨其在宫颈癌发生和发展中的作用。

1 资料和方法

1.1 一般资料 收集2007年1月至2012年12月东阳市人民医院病理科宫颈鳞状细胞癌石蜡标本120例。患者年龄34～77岁，中位年龄55岁；浸润深度：＞宫颈壁厚度1/2者75例，≤1/2者45例；淋巴结转移阳性26例，淋巴结转移阴性94例；组织学分化：高分化21例，中分化84例，低分化15例；临床分期：Ⅰ期81例，Ⅱ～Ⅲ期39例。患者术前均未行任何抗肿瘤治疗。同时收集2012年6至12月东阳市人民医院病理科因子宫肌瘤切除的正常宫颈石蜡标本37例，患者年龄44～59岁，中位年龄50岁；宫颈上皮内瘤变（CIN）石蜡标本89例，患者年龄32～66岁，中位年龄52岁，其中CIN1标本40例、CIN2～3标本49例。所有患者分级和分期均按WHO（2003）标准进行。

1.2 免疫组化染色 所有组标本均以10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm连续切片。免疫组化染色采用En Vision二步法：柠檬酸盐缓冲液高压热修复，0.3%H2O2室温孵育10～15min，以1∶100稀释比例滴加兔抗人EGFR多克隆抗体（美国Santa Cruz公司产品，克隆号：1005），室温孵育1h，再使用En Vision二步法试剂盒（丹麦Dako公司产品）染色，室温孵育40min，最后用DAB显色剂（丹麦Dako公司产品）显色5min，苏木素复染、脱水、透明并封蜡。

1.3 免疫组化结果评价 EGFR蛋白阳性表达主要定位于细胞膜和（或）细胞质。本研究将≥10%宫颈正常上皮细胞或肿瘤细胞胞膜呈弱或强染色视为阳性。染色结果判读由2位病理医师独立完成。

1.4 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 EGFR蛋白在宫颈组织中的表达及分布 EGFR蛋白主要定位于宫颈鳞状上皮细胞或肿瘤细胞胞膜中（见图1）。正常宫颈、CIN1、CIN2～3、宫颈癌组织中EGFR蛋白表达阳性率分别为10.8%（4/37）、12.5%（5/40）、42.9%（21/49）、89.2%（107/120）。EGFR蛋白表达阳性率从CIN1、CIN2～3到宫颈癌组织呈逐步增高趋势（均P＜0.01）；而CIN1和正常宫颈组织之间EGFR蛋白表达阳性率无统计学差异（P＞0.05）。

图1 EGFR蛋白在宫颈组织中的表达（A：正常宫颈组织中EGFR蛋白阴性表达，En Vi si on二步法染色，×200；B：CIN1组织中EGFR蛋白阴性表达，En Vi si on二步法染色，×400；C：CIN2~3组织中EGFR蛋白阳性表达，En Vi si on二步法染色，×400；D：宫颈癌组织中EGFR蛋白阳性表达，En Vi si on二步法染色，×200）

2.2 宫颈癌组织EGFR蛋白表达与患者临床病理特征的关系 肿瘤浸润深度＞宫颈壁厚度1/2的宫颈癌患者中EGFR蛋白表达阳性率较肿瘤浸润深度≤1/2的患者高（P＜0.01）；淋巴结转移阳性患者宫颈癌组织中EGFR蛋白表达均为阳性，表达阳性率高于淋巴结转移阴性患者，提示EGFR蛋白表达可能与宫颈癌患者淋巴结转移有关，但无统计学差异（P＞0.05）；在不同年龄、组织学分化、临床分期的患者间比较，EGFR蛋白表达阳性率均无统计学差异（均P＞0.05），见表1。

表1 宫颈癌组织EGFR蛋白表达与患者临床病理特征的关系[例（%）]

3 讨论

EGFR是表皮生长因子受体家族（HER/erbB家族）的重要成员，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受体，它由胞外配基结合区、跨膜亲脂片段和胞内酪氨酸激酶区3部分组成。当配体（如表皮生长因子）结合于胞外区后，EGFR形成二聚体，引起胞内区自身磷酸化并激活酪氨酸激酶，启动一系列下游信号转导通路，调节细胞各方面功能，包括细胞增殖、凋亡和分化[2]。研究表明，在多种肿瘤细胞中存在EGFR的高表达或异常活化，其通过激活下游磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）和胞外信号调控激酶（MEK-ERK1/2）两条主要的信号通路，在肿瘤细胞增殖、分化以及侵袭转移过程中起了重要作用[2-3]。虽然目前有较多关于宫颈癌中EGFR蛋白表达的报道，但因评分标准和研究人群的差异，不同研究间EGFR蛋白表达阳性率存在较大差异[4-5]。因此，笔者选取宫颈上皮癌变过程中的一系列样本，包括正常宫颈、CIN1、CIN2～3和宫颈癌组织，用免疫组化方法来进一步验证EGFR的表达及其在宫颈癌发生、发展过程中所起的作用。

冯淑瑜等[6]研究显示至正常宫颈上皮组、CIN组到宫颈癌组EGFR蛋白表达显著增强，但该研究并没有将CIN组细分为CIN1和CIN2～3来进一步观察，而且各组别的例数偏少。本研究结果显示从CIN1、CIN2～3到宫颈癌组织，EGFR蛋白表达阳性率呈逐步增强趋势，而正常宫颈组织跟CIN1之间则无统计学差异，说明EGFR蛋白可能在病变进展为CIN2～3和宫颈癌的过程中发挥主要作用。结合EGFR蛋白表达阳性率在肿瘤浸润深度较深的宫颈癌患者中较高，提示EGFR蛋白在宫颈癌进展过程中发挥了重要作用，特异性阻断其表达或活化可能会成为抗宫颈病变进展的一个潜在手段，值得进一步研究。

目前研究发现，EGFR蛋白表达可能受到微小RNA的调控，其可能通过下游的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路从而影响肿瘤发生和发展[7-8]。然而，关于EGFR影响宫颈癌进展的机制目前尚未见相关报道，笔者将进一步研究并试图阐明其机制。

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Expression of EGFR in cervical cancer and its relation to clinicopathology

HUANG Bifei,WANG Chaoqun,ZHAO Yongming,et al. Department of Pathology,Dongyang People's Hospital,Dongyang 322100,China

Objective To investigate the expression ofepidermalgrowth factor receptor 1(EGFR)in cervical cancer and to evaluate its clinicopathological significance. Methods The immunohistochemical EnVision method was used to evaluate the expression of EGFR in 120 cases of cervical cancer,49 cases of high-grade intraepithelial neoplasia (CIN2～3),40 cases of low-grade intraepithelial neoplasia(CIN1)and 37 cases of normal cervical tissues. Results EGFR protein expression rates in normal cervical tissues,CIN1,CIN2～3and cervical cancer were 10.8%(4/37),12.5%(5/40),42.9%(21/49)and 89.2%(107/120), respectively.The EGFR positive rate in cervical cancer was significantly higher than those in CIN2～3,CIN1and normal cervical tissues(P＜0.01);and the positive rate in CIN2～3was significantly higher than those in CIN1and normalcervicaltissues(P＜0.01);but there was no significant difference between normal cervical tissue and CIN1(P＞0.05).EGFR protein positive rate was higher in patients with deeper invasion ofcervical carcinoma(P＜0.01). Conclusion Results indicates that EGFR may play an important role in the development ofcervicalcancer and it may become a potentialtarget for anti-cancer therapy.

EGFR CervicalcancerImmunohistochemistry

2015-04-17）

（本文编辑：胥昀）

浙江省金华市科技计划重点项目（2012-3-021）；浙江省医药卫生科技计划项目（2012KY B230）；浙江省金华市科技计划项目（2013-3-097）

322100 东阳市人民医院病理科（黄必飞、王超群、孙鑫鑫、王倩、陈艳、吴爱姣、曾悦、吴丹丹），肿瘤外科（赵永明），肿瘤内科（王艳）

黄必飞，E-m ai l：hbf x711023@163.com