刘思乐 康劲翮 谭支良 王 征

(1.中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室，长沙410125；2.湖南农业大学生物科学技术学院，长沙410128)



不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18表达量的影响

刘思乐1,2康劲翮1*谭支良1王 征2*

(1.中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室，亚热带农业生态研究所，湖南省农业生态过程重点实验室，长沙410125；2.湖南农业大学生物科学技术学院，长沙410128)

本试验旨在研究不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18(CK18)表达量的影响。采集42日龄山羊的瘤胃上皮组织，分别采用酶消化法和组织块法对其进行体外培养。通过光学显微镜观察原代培养和传代培养阶段的细胞形态，检测第5代山羊瘤胃上皮细胞的生长曲线，并采用细胞免疫荧光法对山羊瘤胃上皮细胞进行鉴定。结果显示：1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于2d开始贴壁生长，5d细胞开始明显增多，10d细胞数量达到最大。2)经组织块法获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于4d开始“爬出”组织块，8d细胞开始明显增多，14d细胞数量达到最大。3)经免疫荧光染色显示2种方法获得的细胞胞浆内CK18均呈阳性表达且细胞纯度后者明显高于前者。4)组织块法获得的细胞CK18表达量显著高于酶消化法(P<0.05)。综合得出，与酶消化法相比，应用组织块法可成功获得纯度更高的山羊瘤胃上皮细胞。

山羊；瘤胃；上皮细胞；原代培养；分离；CK18

瘤胃是反刍动物消化代谢和营养物质吸收最重要的场所。……