葛 婧，郭永军,王庆奎，徐大为，孙学亮，陈成勋，邢克智

( 天津农学院 水产学院，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384 )

贯众、当归、黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

葛 婧，郭永军,王庆奎，徐大为，孙学亮，陈成勋，邢克智

( 天津农学院 水产学院，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384 )

在水温(21±1) ℃和盐度20±1下，将体质量(95.45±5.29) g的半滑舌鳎饲养在78 cm×58 cm×46 cm水槽中，投喂按0、5、10、15 g/kg添加贯众、当归、黄芪的饲料，每箱20尾，每个水平3个重复，7 d、14 d和21 d时尾柄采血，测定总超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性以及总抗氧化能力、丙二醛、总胆固醇和甘油三酯含量。试验结果表明，14 d时，贯众剂量为15 g/kg组的半滑舌鳎血液中总超氧化物岐化酶活力显著高于对照组(P<0.05)，14 d和21 d时，各剂量组丙二醛含量均低于对照组；14 d时，当归剂量为5 g/kg组的半滑舌鳎血液中总超氧化物岐化酶活力达到最高值；21 d时，黄芪剂量为10 g/kg组的丙二醛含量值显著低于对照组(P<0.05)，21 d时，黄芪剂量为5 g/kg组的半滑舌鳎血液中总超氧化物岐化酶活力达到最高值，不同剂量的黄芪对过氧化氢酶活力有显著影响，但均低于对照组(P<0.05)；7 d时，各组总抗氧化能力达到最高值。试验表明，单独添加贯众、当归及黄芪均不同程度地影响半滑舌鳎血液的抗氧化指标。

贯众；当归；黄芪；半滑舌鳎；抗氧化指标

随着水产养殖业的不断发展，水产动物病害频发，抗生素和化学药品的使用量不断增加，导致水域生态环境恶化[1]。研究表明，许多疾病的发生发展与自由基及其诱导的氧化反应有关[2-4]。中草药低毒，无抗药性，能促进水产动物生长，增强抗氧化能力[5-6]，有效清除自由基对水产动物机体的氧化损伤[7]。研究发现，中草药作为天然植物，具有防御、清除和修缮多余自由基的系统，而超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等抗氧化酶是其重要组成部分[8]。因此寻求能有效清除水产动物体内自由基、减少疾病发生、促进生长的中草药饲料添加剂极其重要。

贯众(Cyrtomiumrhizome)具有清热解毒，抗菌等作用[9]，当归(Angelicasinensis)具有抗氧化和免疫等功能[10]，黄芪(Astragalus)具有免疫和增强造血功能[11]。研究发现，饲料中添加贯众可显著提高斑点叉尾(Ictaluruspunctatus)肌肉总超氧化物岐化酶活力[12]。饲料中添加当归多糖能有效提高点带石斑鱼(Epinephelusmalabaricus)非特异性免疫力和抗病力[13]。饲料中添加黄芪可以明显提高凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)总超氧化物岐化酶活力[14]。

基于此，将贯众、当归、黄芪按不同剂量分别添加到饲料中喂食半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)，研究其对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响，为其在半滑舌鳎健康养殖中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

贯众、当归及黄芪原药(天津市药材公司)按比例称量，温水浸泡50 min，砂锅3次煎煮(加入20倍量水，汤药微微沸腾前用武火，沸腾后改用文火，一煎40 min，二煎35 min，三煎30 min，连续煎煮)后滤除药渣，汤剂全部添加到半滑舌鳎基础饵料中。基础饵料以鱼粉、鱼油、食用淀粉等为原料制成(表1)。

1.2 方法

贯众、当归及黄芪分别按0、5、10、15 g/kg的添加量，配制成等氮等能饲料。饲养周期21 d，每个水平3个重复，每箱20尾。驯化7 d 后投喂试验饲料，投喂试验饲料的第7 d、14 d和21 d时取样。

采样前停食24 h，用间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(100 mg/L)麻醉，每箱随机取6尾鱼，2 mL无菌注射器尾柄采血，肝素钠(50 U/mL)抗凝，4 ℃，5000 r/min离心10 min，取上清液，-80 ℃保存备用。用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定血液中总超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性，总抗氧化能力及丙二醛、总胆固醇和甘油三酯的含量。

表1 饲料配方组成和营养组成 %

注：a (mg/kg): Ca(H2PO4)2·H2O, 14673.37; ZnSO4·7H2O, 65.97; CuSO4·5H2O, 10.61; FeSO4·7H2O, 109.54; KI, 32.7; CoCl2·6H2O, 0.2; Na2SeO3, 0.33; MnSO4·H2O, 24.61；其他为碳酸钙粉. b (mg/kg): 维生素B2, 55; 维生素B6, 15; 维生素B1, 4; 维生素K, 3;叶酸, 25; DL-泛酸钙,60; 烟酸, 220; 维生素B12, 0.27; 肌醇,1000; 叶酸, 13.5; (IU/kg): 维生素A, 2400; 维生素D, 6600; 维生素E, 675; 维生素C,2700; 胆碱，1%.

1.3 数据分析

数据用平均值±标准差表示，采用SPSS 18.0软件进行作单因素方差分析，LSD和Duncan法比较数据间差异显著性，P<0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 贯众对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

喂食14 d时，15 g/kg组半滑舌鳎血液中总产氧化物歧化酶活力达最高值，显著高于对照组(P<0.05)；21 d时过氧化氢酶活力明显升高，5 g/kg组显著高于对照组(P<0.05)；投喂14 d时，由0 g/kg组至15 g/kg组总抗氧化能力活力逐渐升高。14 d和21 d时，不同剂量组半滑舌鳎血液中丙二醛含量值均低于对照组，但7 d时高于对照组。7 d时，不同剂量组半滑舌鳎血液中总胆固醇含量均有影响，15 g/kg组高于对照组，但贯众对甘油三酯含量值无显著影响(P>0.05)(表2、表3)。试验结果表明，不同贯众含量组半滑舌鳎血液抗氧化指标均有不同程度的影响，但对各个指标影响结果不同，未表现出相同趋势。

表2 不同剂量贯众对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(平均值±标准差)

表3 不同剂量贯众对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(差异显著性)

注：同列数字肩标不同字母的平均值间差异显著(P<0.05).下表同.

2.2 当归对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

喂食14 d时，不同剂量组半滑舌鳎血液中总超氧化物岐化酶活力最高，5 g/kg组显著高于对照组(P<0.05)。7 d时，不同剂量组过氧化氢酶活力均高于对照组，但在14 d和21 d时，各组过氧化氢酶活力均低于对照组。21 d时，5 g/kg组半滑舌鳎血液中总抗氧化活力显著高于对照组(P<0.05)。21 d时，10 g/kg组丙二醛含量值显著低于对照组(P<0.05)。7 d时，不同剂量组总胆固醇值均高于对照组， 15 g/kg组最高，但在14 d和21 d时均低于对照组。不同剂量当归对甘油三酯值无显著影响(P>0.05)(表4、表5)。试验结果表明，不同剂量组的当归对半滑舌鳎血液抗氧化指标有不同程度的影响，但对各个指标的影响趋势不同。

表4 不同剂量当归对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(平均值±标准差)

表5 不同剂量当归对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(差异显著性)

2.3 黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

14 d和21 d时，黄芪不同剂量组半滑舌鳎血液中总超氧化物岐化酶活力均高于对照组，21 d时5 g/kg组达最高值。不同剂量的黄芪对过氧化氢酶活力有显著影响(P<0.05)，但均低于对照组。7 d时，各组总抗氧化能力最高。不同剂量组丙二醛含量均低于对照组，但无明显波动。不同剂量组黄芪对总胆固醇含量和甘油三酯含量均无显著影响(P>0.05)(表6、表7)。试验结果表明，不同剂量组的黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标有不同程度的影响，但对各个指标的影响趋势不同。

表6 不同剂量黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(平均值±标准差)

表7 不同剂量黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响(差异显著性)

3 讨 论

总超氧化物岐化酶能有力清除机体超氧阴离子自由基，使机体免受氧化损伤[15-16]。丙二醛是氧自由基产生脂质过氧化物的分解产物，含量变化可间接反映机体细胞损伤的程度[17]。过氧化氢酶是机体清除氧自由基的关键酶类，可增强巨噬细胞的防御能力及机体的免疫能力[18]。总抗氧化能力，总胆固醇和甘油三酯含量也是反映血液抗氧化能力的重要指标。

3.1 贯众对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

贯众能有效提高水产动物抗氧化水平，如降低施氏鲟(Acipenserschrenckii)血浆中丙二醛含量[19]。有研究表明，不同规格大小的褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)饲料中添加金银花(Lonicerajaponica)、人参(Panaxginseng)和山楂(Crataeguspinnatifida)等中草药，饲喂28、56 d和83 d后，结果显示，血清中总超氧化物岐化酶活力分别提高了9.53%、9.09%和15.14%[20]；黄鳝(Monopterusalbus)饲料中添加茯苓(Wolfiporiacocos)、黄芪及五加皮(Lysionotusaeschynanthoides)，研究结果发现，可显著增加其血清总超氧化物岐化酶活力[21]。本试验中，不同剂量贯众对半滑舌鳎血液总超氧化物岐化酶和过化氢酶活力、总抗氧化能力、丙二醛和总胆固醇含量均有显著影响。14 d和21 d时不同剂量贯众均能降低半滑舌鳎血液中丙二醛含量，说明对半滑舌鳎血液抗氧化指标有不同程度的影响，能有效地防御、清除和改善半滑舌鳎血液中多余自由基，提高其抗氧化能力。

3.2 当归对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

当归作为水产饲料常用添加剂，可调节机体免疫水平。饲料中添加当归多糖有效提高了点带石斑鱼的非特异性免疫力[13]。研究表明，异育银鲫(Carassiusauratusgibelio)饲料中添加200～300 mg/kg植物提取物，鱼体肝脏内总超氧化物岐化酶和过氧化氢酶活性显著升高，丙二醛含量显著降低[22]；镜鲤(Cyprinuscarpio)饲料中添加0.5%、2.5%的大蒜(Alliumsativum)茎粉，连续投喂56 d后，发现可显著提高肝脏中总超氧化物歧化酶活性，显著降低血清中丙二醛含量[23]。本试验中，不同剂量当归显著影响了半滑舌鳎血液总超氧化物岐化酶和过氧化氢酶活力，以及总抗氧化能力，总胆固醇含量，但各指标值在不同取样时间上并无一致趋势，其原因可能是半滑舌鳎养殖环境的不同，或者添加当归提取物以及当归添加方式的不同对半滑舌鳎血液抗氧化指标有不同影响。

3.3 黄芪对半滑舌鳎血液抗氧化指标的影响

黄芪添加到饲料中能提高水产动物的非特异免疫酶活性，增强免疫力。研究发现，黄芪熬制成浓缩液制成饲料对半滑舌鳎非特异免疫活性较黄芩(Scutellariabaicalensis)，鱼腥草(Houttuyniacordata)效果好[24]。仿刺参(Apostichopusjaponicus)摄食含黄芪多糖的饲料时，免疫力提高[25]。也有研究表明，银杏(Ginkgobiloba)叶提取物可使鲫鱼(Carassiusauratus)血清中总超氧化物岐化酶活力显著升高，丙二醛含量显著降低[26]；鳗鲡(Anguillajaponica)饲料中分别添加0.5、1.0、1.5 g/kg的复方中草药，发现在连续投喂60 d后，可显著提高血清总超氧化物岐化酶活力[27]。本试验中，不同剂量黄芪对半滑舌鳎血液总超氧化物岐化酶和过氧化氢酶活性及丙二醛含量有显著影响，说明黄芪可有效清除半滑舌鳎血液中自由基含量，但对于总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响。其原因可能如上述研究，黄芪提取物或者黄芪添加方式的不同对其影响不同。

本试验结果表明，不同剂量的贯众、当归和黄芪均能不同程度提高半滑舌鳎的血液抗氧化能力，但三者的最适宜添加量以及适宜的投喂时间需进一步研究。

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EffectofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis,andAstragalusonBloodAntioxidantParametersinHalf-smoothTongue-sole(Cynoglossussemilaevis)

GE Jing, GUO Yongjun, WANG Qingkui, XU Dawei, SUN Xueliang, CHEN Chengxun, XING Kezhi

( College of Fisheries, Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture,Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China )

A feeding trial was conducted to evaluate effect ofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis, andAstragaluson blood parameters including activities of total superoxide dismutase (T-SOD), total antioxidant capacity (T-AOC), and catalase (CAT), and levels of malonaldehyde (MDA), triglyceride (TG), and total cholesterol (T-CHO) in half-smooth tongue-sole (Cynoglossussemilaevis). Juvenile half-smooth tongue-sole with body weight of (95.45±5.29) g were reared in tanks of each 78 cm×58 cm×46 cm at a rate of 20 fish/tank and fed diets containingC.rhizome,A.sinensis, orAstragalusat different doses of 0 g/kg diet, 5 g/kg diet, 10 g/kg diet, and 15 g/kg diet for 21 days with triplication at water temperature of (21±1) ℃ and a salinity of 20±1. The activities of T-SOD, T-AOC, and CAT, and levels of MDA, TG, and T-CHO were detected in blood of the half-smooth tongue-sole in 7 days, 14 days and 21 days during the rearing period. It was found that the fish fed the diet supplemented withC.rhizomeat a dose of 15 g/kg diet had significantly higher T-SOD activity than the fish fed the control diet in 14 days, and had significantly lower MDA content than the fish fed the control group in 14 and 21 days (P<0.05). The maximal T-SOD activity was observed in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a dose of 5 g/kg diet in 14 days. There were significantly lower MDA content in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a rate of 10 g/kg diet than in the fish in the control group in 21 days (P<0.05). Diet supplemented withAstragalusat a dose of 5 g/kg diet resulted in significantly higher T-SOD activity and significantly lower CAT activity in 21 days compared to the control diet (P<0.05). There was significantly higher T-AOC activity in the fish fed the diet containing different doses ofAstragalusin 7 days. The findings indicated thatC.rhizome,A.sinensis,andAstragalussupplementation affected to some extent on blood antioxidant parameters in half-smooth tongue-sole.

Cyrtomiumrhizome;Angelicasinensis;Astragalus;Cynoglossussemilaevis; antioxidant parameter

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.05.006

S965.399

A

1003-1111(2016)05-0492-06

2016-01-21；

2016-04-25.

国家星火计划项目(2013GA610002)；国家自然科学基金面上项目(31270456)；天津市科技支撑计划项目(13ZCZDNC00700)；天津市高等学校创新团队基金资助项目(TD12-5018).

葛婧(1989—)，女，硕士研究生；研究方向：水产动物病害防治与免疫学.E-mail：532462825@qq.com.通讯作者:郭永军(1969—)，男，研究员；研究方向：水产动物病害防治与免疫学.E-mail：guoyongjun@tjau.edu.cn.