焦 展，安胜军*，邵铁梅，仵 陶，李 雪，刘 培，高维娟，柴锡庆

(1.河北化工医药职业技术学院，河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心，河北 石家庄 050026；2.河北中医学院，河北 石家庄 050200)



油葵转化体系建立和重组人胰岛素的初步表达

焦 展1，安胜军1*，邵铁梅1，仵 陶1，李 雪1，刘 培1，高维娟2，柴锡庆1

(1.河北化工医药职业技术学院，河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心，河北 石家庄 050026；2.河北中医学院，河北 石家庄 050200)

为建立并研究利用油葵油体表达系统表达重组人胰岛素蛋白的方法，采用PCR技术构建植物种子特异性表达载体，经花粉管通道用重组人胰岛素基因转化油葵。利用PCR法检测目的基因的转化情况，用SDS-PAGE和Western blot对胰岛素蛋白的表达进行鉴定。结果表明，合成了重组人胰岛素与花生油体蛋白融合基因，并获得植物种子特异性表达载体pBINOI。花粉管通道转化油葵的适宜条件为，花柱剪切1/2，质粒浓度为50～100 ng/μl转化效率最高。PCR结果显示，油葵花粉管通道法转胰岛素基因总转化率为3.2 %，温室转化率(5.20 %)高于大田转化率(1.12 %)。获得T1～T5代转基因种子，播种为T1～T5代植株。获得的1号转基因株系T5代植株阳性/阴性植株为11∶1。经SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测结果显示，融合蛋白约为23 kDa，重组人胰岛素基因在油葵种子中得到了表达。本实验建立了转基因油葵油体表达系统，且该系统能够成功表达重组人胰岛素。

转基因油葵；花粉管通道；重组人胰岛素；融合表达

胰岛素(Insulin)是治疗糖尿病的主要药物。……