罗丹枫 龚静吉 程腾 魏睿 魏军成 祝文涛

·实验研究论著·

重组蛋白sCAR⁃TMTP1增强腺病毒对骨肉瘤细胞基因转染效率的研究

罗丹枫 龚静吉 程腾 魏睿 魏军成 祝文涛

目的提高腺病毒（adenovirus,ADV）在缺乏柯萨奇腺病毒受体（coxsackie and adenovirus receptor,CAR）的骨肉瘤细胞中的转染效率。方法通过昆虫（Bac⁃to⁃Bac）杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段（sCAR）及TMTP1肽的重组蛋白（sCAR⁃TMTP1），并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293（HEK293）的CAR表达水平，ADV对其的感染效率及FITC⁃TMTP1的结合能力。重组蛋白sCAR⁃TMTP1与ADV共同孵育形成复合物，流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞（MG⁃63）中的转染效率。结果表达及纯化的sCAR⁃TMTP1蛋白在相对分子质量约31 000处可见特异蛋白条带，感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠sCAR单克隆抗体发生特异性反应。MG⁃63可与FITC⁃TMTP1特异结合，其CAR表达水平低，ADV转染效率低。经sCAR⁃TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG⁃63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV（ADV/GFP）。结论重组蛋白sCAR⁃TM⁃TP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。

骨肉瘤；腺病毒；TMTP1肽；柯萨奇腺病毒受体；重组蛋白；基因治疗；肿瘤细胞

骨肉瘤（osteosarcoma）是最常见的原发恶性骨肿瘤，好发于青少年，其极易出现复发和转移，且血行转移发生早，其中最常见的是肺转移。对于发生转移的患者，常规进行手术治疗及化疗，但临床疗效不佳，愈后不良，亟需探索发现新的治疗模式［1］。

基因治疗是一种有前景的新型治疗策略，腺病毒（adenovirus,ADV）因具有转染效率高、不整合到靶细胞基因组中、遗传毒性低等优点，已成为基因治疗中最常见的病毒载体之一［2］。……