叶亚平 李觅 吴颖星 黄俊明 印卫锋 郭风劲

·实验研究论著·

溶血磷脂酸通过RhoA⁃YAP通路调控脂肪干细胞增殖的研究

叶亚平 李觅 吴颖星 黄俊明 印卫锋 郭风劲

目的探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）调控脂肪干细胞（adipose⁃derived stem cells,ASCs）增殖的作用及其分子机制。方法分离SD大鼠ASCs，利用LPA对其进行干预，干预时间为1 h，采用Western Blot检测YES相关蛋白（yes associated protein,YAP）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）蛋白表达水平。利用免疫荧光检测YAP亚细胞定位，逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT⁃PCR）检测CTGF和Ankrd1的mRNA表达水平。慢病毒转染ASCs，Western Blot检测不同分组YAP蛋白表达。进一步利用流式细胞术和CCK⁃8法检测不同分组中ASCs增殖情况。最后采用RhoA抑制剂C3干预，免疫荧光检测不同分组中YAP亚细胞定位，Western Blot检测YAP、CTGF和GTP⁃RhoA的表达情况。结果LPA能显著促进YAP的表达和在细胞核内的聚集，同时LPA也能够促进YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表达。LPA能上调YAP靶基因CTGF和锚蛋白重复域1（ankyrin repeating domain 1,Ankrd1）的mRNA表达水平。慢病毒转染敲除YAP表达后，LPA对YAP的上调作用被明显抑制。细胞周期流式细胞术和CCK⁃8检测结果显示LPA可显著促进ASCs的增殖，但在shYAP慢病毒转染特异性敲除YAP后，LPA对ASCs的促增殖能力被明显削弱。RhoA抑制剂C3处理后，LPA对YAP细胞核聚集的促进作用被削弱，同时LPA对YAP、CTGF和GTP⁃RhoA表达的促进作用也得到了明显抑制。结论LPA能够通过RhoA⁃YAP通路调控ASCs的增殖。

溶血磷脂酸；脂肪干细胞；RhoA⁃YAP通路；细胞增殖

间充质干细胞为具有自我更新能力的成体干细胞，其能向中胚层方向（如软骨细胞、成骨细胞和脂肪细胞等）分化［1］。间充质干细胞存在于诸多部位，如骨髓、脂肪、牙髓及滑膜等组织中［2，3］。Zuk等［4］学者最早在脂肪组织中发现间充质干细胞，并将其命名为脂肪干细胞（adipose⁃derived stem cells, ASCs）。……