赵晓婷，孙洁，王翠芳*

（1沈阳医学院基础医学院病理学与病理生理学系，沈阳 110034；2沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳 110024）

Ki-67在基底细胞样型乳腺癌中的诊断价值

赵晓婷1，孙洁2，王翠芳2*

（1沈阳医学院基础医学院病理学与病理生理学系，沈阳 110034；2沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳 110024）

目的 分析细胞增殖抗原Ki-67与雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）和人表皮生长因子受体（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）在乳腺癌表达的相关性，探讨Ki-67在基底细胞样型乳腺癌和非基底细胞样型乳腺癌的表达与临床病理特征的关系。方法 选取65例女性浸润性乳腺癌标本，其中包括27例基底细胞样型乳腺癌，38例非基底细胞样型乳腺癌及癌旁组织标本，采用免疫组织化学技术检测Ki-67、ER、PR、HER2在乳腺癌的表达。结果 65例乳腺癌中，Ki-67表达与ER、PR呈负相关，与HER2无相关性。在基底细胞样型乳腺癌组织中，Ki-67在细胞核强阳性表达。基底细胞样型乳腺癌与非基底细胞样型乳腺癌比较，Ki-67表达与组织学分级相关，组织学分级越高，Ki-67表达越强。结论 Ki-67可能参与基底细胞样型乳腺癌的发生发展，对预后评价有重要的参考价值。

乳腺癌；基底细胞样型乳腺癌；Ki-67；ER；PR；HER2

浸润性乳腺癌是女性最常见的肿瘤，是一种高度异质性恶性肿瘤［1］。乳腺癌分子亚型的最初证据来自于cDNA微芯片的基因表达研究。基底细胞样型乳腺癌（basal-like breast carcinoma，BLBC）是指具有基底细胞基因表型并不同程度的表达基底细胞角蛋白和肌上皮标记物的乳腺癌，是一组以基因表达谱确定的预后较差的高级别乳腺癌。其免疫组织化学常常ER、PR、HER2均为阴性，CK5／6和（或）EGFR阳性。Ki-67的表达与恶性肿瘤存在密切关系，能较好地反映肿瘤的恶性程度和预后。本文主要通过研究具有或不具有基底细胞样型乳腺癌的临床病理学因素（年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移情况、组织学分级）与Ki-67、ER、PR、HER2蛋白相互之间的关系，探讨两型乳腺癌中Ki-67蛋白表达的差异性。

材料和方法

1 材料

收集沈阳医学院附属中心医院2013年1月至2015年12月女性浸润性乳腺癌65例，其中基底细胞样型乳腺癌标本27例，非基底细胞样型乳腺癌标本38例，癌旁组织标本作为对照组。患者年龄45～85岁，平均年龄65岁。

2 试剂

即用型鼠抗人单克隆抗体Ki-67（克隆号MIB-1）、兔抗人单克隆抗体ER（克隆号SP1）、兔抗人单克隆抗体PR（克隆号SP2）、兔抗人单克隆抗体HER2（克隆号EP3）均购自福州迈新生物技术开发有限公司。SP检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

3 SP法免疫组织化学染色

所有乳腺癌患者组织切除后都使用4%的甲醛固定，依据病理规定规范取材，石蜡包埋，4μm连续切片，常规石蜡脱水，柠檬酸抗原高压修复（pH6.0）25min，室温冷却30min，用0.01mol／L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）冲洗3min，每次3次，用油笔圈定玻片上的待测组织区域。每张切片加1滴或50μl过氧化酶阻断试剂（试剂A），室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次，每次3min。除去PBS液，每张切片加1滴或50μl正常非免疫动物血清（试剂B），室温下孵育10min。除去血清，每张切片加1滴或50μL的第一抗体，4℃过夜。PBS冲洗3次，每次3min。除去PBS液，每张切片加1滴或50μl生物素标记的第二抗体（试剂C），室温下孵育10min，PBS冲洗3次，每次3min。除去 PBS液，每张切片加1滴或50μl链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液（试剂D），室温下孵育10min，PBS冲洗3次，每次3min。除去 PBS液，每张切片加2滴或100μl新鲜配置的DAB，显微镜下观察3～10min。自来水冲洗，苏木素复染，PBS或自来水冲洗返蓝。用DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。

4 免疫组织化学结果判定

所有切片标本由2名经验丰富的病理科医师采用双盲法进行阅片并判断阴、阳性表达。Ki-67、ER、PR定位于肿瘤细胞的细胞核，HER2定位于细胞膜。ER、PR阳性细胞数值 ＜10% 为（-），10% ～25% 为（＋），25%～50%为（＋＋），≥50%为（＋＋＋，强阳性［2］）。HER2：阳性细胞着色定位于细胞膜。0：无染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；＋：＞10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；＋＋：有两种情况，第一种为：＞10%的浸润癌细胞呈现不完整和／或弱至中等强度的细胞膜染色，第二种为：≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；＋＋＋：＞10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色［3］。Ki-67判定标准Ki-67阳性细胞数＜10%为阴性（-），10%～29%为低表达（＋），30%～49%为中度表达（＋＋），＞50% 为强阳性表达（＋＋＋）［4］。为统计学方便，本研究显色0～＋定为阴性，＋＋～＋＋＋为阳性。

5 统计学处理

数据采用SPSS13.0统计软件进行分析，采用四格表卡方检验和非参数统计中Spearman等级相关检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结　果

1 Ki-67、ER、PR、HER2在基底细胞样型乳腺癌的免疫组织化学表达

免疫组织化学染色显示，在基底细胞样型乳腺癌组织中，Ki-67在细胞核强阳性表达，ER、PR在细胞核阴性表达，HER2在细胞膜阴性表达；在癌旁组织中，Ki-67在细胞核阴性表达，ER在细胞核强阳性表达、PR在细胞核中度阳性表达，HER2在细胞膜阴性表达（图1）。

2 乳腺癌中Ki-67与ER、PR、HER2的相关性

65例乳腺癌中，ER阳性24例（36.9%），ER阴性41例（63.1%），PR阳性15例（23.1%），PR阴性50例（76.9%），HER2阳性12例（18.5%），HER2阴性53例（81.5%）。Spearman等级相关检侧分析显示，Ki-67表达与ER、PR呈负相关（r＝-0．377，P＝0．002；r＝-0．280，P＝0．024），与HER2无相关性（r＝-0．004，P＝0．973）（表1）。

图1　Ki-67、ER、PR、HER2在癌旁乳腺组织和基底细胞样乳腺癌组织中的免疫组织化学表达；比例尺：癌旁组织，20μm；基底细胞样乳腺癌组织，40μmFig.1　Immunohistochemical expression of Ki-67，ER，PR and HER2 in para-carcinoma tissues and BLBC tissues.Scale bar，20μm in para-carcinoma tissues；40μm in BLBC tissues

表1　Ki-67表达与 ER、PR、HER2的相关性Table 1　Expression correlation of Ki-67 to ER，PR and HER2 in BLBC

3 基底细胞样乳腺癌与Ki-67表达和临床病理特征的关系

65例乳腺癌患者标本中，基底细胞样乳腺癌27例，非基底细胞样乳腺癌38例。基底和非基底细胞样乳腺癌与年龄、淋巴结转移情况、肿瘤大小、组织学分级以及Ki-67表达的关系由卡方检验检测（表2）。在27例基底细胞样乳腺癌中，Ki-67阳性25例（92.6%），阴性2例（7.4%）；在38例非基底细胞样乳腺癌中，Ki-67阳性24例（63.2%），阴性 14例（36.8%）。基底细胞样乳腺癌和非基底细胞样乳腺癌比较，年龄（χ2＝0.035）、原发肿瘤的大小（χ2＝0.028）和淋巴结转移（χ2＝0.074）无统计学差异，而组织学分级（χ2＝30.236）和Ki-67（χ2＝7.37）表达均有统计学差异（P＜0.01）。组织学分级越高，Ki-67表达越强。

表2　基底细胞样型乳腺癌与Ki67表达和临床病理特征的关系Table 2　Relation of Ki-67 expression to clinicopathologicalfeatures and breast cancer subtypes

讨　论

基底细胞样型乳腺癌是乳腺癌的一种特殊亚型，由于基因表型独特、恶性程度高、预后差，成为国内外研究乳腺癌的热点。2000年Perou等［5］通过cDNA微阵列技术将乳腺癌分为5个亚型，其中包括基底亚型。根据基因芯片表达谱分析，基底细胞样型乳腺癌的发病率约为15%，约占全部乳腺癌的8%～20%［6］。有报道认为基底细胞样型乳腺癌在年轻的亚裔和南美洲妇女中较常见。因为肿瘤生长较快，所以常常被患者自己发现。此外，基底细胞样型乳腺癌的组织学特点目前还不完全清楚，尽管某些形态学特征，比如高组织学级别、地图状坏死、推挤性边缘提示肿瘤为基底细胞样型乳腺癌，但这些形态学特征特异性不高，即不是所有的基底细胞样型乳腺癌都具有这些特征。

ER、PR、HER2的阳性表达对乳腺癌内分泌治疗和靶向治疗有指导意义。研究表明［7］，当乳腺上皮细胞在发生癌变时，ER、PR有不同的表达形式，一种是ER、PR为阳性表达，说明原来的激素对癌细胞仍起着调节作用，往往分化较好，称之为激素依赖性肿瘤；另一种是ER、PR为阴性表达，说明激素对细胞生长不起调节作用，肿瘤分化较差，称之为非激素依赖性肿瘤。Hussein等研究表明［8］HER2在乳腺癌中表达率一般为10%～34%，其表达与预后不良有关。本研究中，HER2阳性表达率为18.5%，与报道相近。另外，本研究表明Ki-67与ER、PR呈负相关，而与HER2无相关性，从某种程度上说明HER2可作为一种独立的预后指标。

Ki-67是由Gerdes等［9］在1983年从霍奇金淋巴瘤系发现的一种增殖细胞相关的核抗原，仅在增殖细胞核中表达，被普遍认为是一种评价肿瘤细胞增殖活性较理想的标记物，也是现阶段应用最广泛的增殖细胞标记物之一［10］。Ki-67表达可反映肿瘤细胞活性，与恶性肿瘤的发展、转移和预后密切相关［11］。本实验发现，Ki-67在乳腺癌的阳性表达率为75.4%，与Bhatavdekar［12］等报道Ki-67在乳腺癌的阳性表达率78.0%结果相近，说明Ki-67参与乳腺癌的发生发展。此外，研究报道［13］Ki-67阳性表达率高的乳腺肿瘤细胞的恶性度更高，细胞增殖活跃，容易发生侵袭、复发、转移。我们的研究也发现，本研究通过分析两组乳腺癌与临床病理特征及Ki-67表达的关系，发现Ki-67表达与组织学分级有关，而与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关。由于基底细胞样型乳腺癌具有组织学分级高，预后差特点，以及本实验表明Ki-67在基底细胞样型乳腺癌中表达高，提示其可以作为预后指标。总之，Ki-67、ER、PR、HER2分子标记物的表达情况，在临床化疗、内分泌治疗和靶向治疗以及预后提供重要的意义。

[1]张众,王华新,谢丰培.乳腺癌异质性及其临床意义.临床与实验病理学杂志,2014,30(5):473-477.

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［3］乳腺癌HER2检验指南（2014版）编写组.乳腺癌HER2指南（2014版）.中华病理学杂志，2014，43（4）：262-267.

[4]Wolff AC,Hammond ME,Hicks DG,et al.Recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer:American Society of Clinical Oncology／College of American Pathologists Clinical Practice Guideline Update.J Clin Oncol,2013,1(31):3997-4013.

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The value of Ki-67 in the diagnosis of basal-like breast carcinoma

Zhao Xiaoting1,Sun Jie2,Wang Cuifang2*
（1Pathology and Pathophysiology Major，College of Basic Medical Sciences，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2Department of Pathology，The Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College，Shenyang 110024）

Objective To analyze the correlation of Ki-67 expression with estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR) and human epidermal growth factor receptor-2(HER-2)in breast cancer,and to explore the relationship between Ki-67 expression and the clinicopathological features of basal cell-like(BLBC)／non-basal cell-like breast cancer(NBLBC).Methods 65 cases of female invasive breast cancer were selected for immunohistochemistry,including 27 cases of BLBC and 38 cases of NBLBC with para-carcinoma tissue.The expressions of Ki-67,ER,PR and HER2 in breast cancer were detected by immunohistochemistry.Results In the 65 cases of breast cancer,the expression of Ki-67 was negatively correlated with those of ER and PR,while unrelated to HER2.In BLBC tissue,strong positive expression of Ki-67 was detected in cell nuclei.A comparison of the BLBC and NBLBC showed a correlation between Ki-67 expression and the histological grade of the cancer.Ki-67 expression was stronger in cancer tissues with higher histological grades[1].Conclusions Ki-67 may be involved in the occurrence and development of BLBC and has important reference value in the evaluation of BLBC prognosis.

Breast cancer；basal-like breast carcinoma；clinicopathological characteristics；Ki-67；ER；PR；HER2

R737.9

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.05.009

2016-07-12

2016-10-15

赵晓婷，女（1990年），汉族，硕士研究生

（To whom correspondence should be addressed）：sywcf321＠sohu.com