苏志 （河南省信阳市平桥区畜牧局 464000)

A型产气荚膜梭菌致仔猪猝死症的诊断

苏志 （河南省信阳市平桥区畜牧局 464000)

通过对病猪病例剖检和实验室诊断，确定哺乳仔猪死亡由A型产气荚膜梭菌感染引起，提出相应的综合防控措施。

A型产气荚膜梭菌；哺乳仔猪；实验室诊断

1892年，美国病理学家W·H·韦尔奇等最早分离到产气荚膜梭菌，因而又称韦氏梭菌或魏氏梭菌。该菌广泛存在于土壤、人和动物的肠道中，其致病性主要是由其产生的外毒素引起的。

在生产中，由魏氏梭菌引起产房仔猪红痢的案例多有报道，但引起哺乳仔猪猝死的案例尚不多见。近日，通过实验室诊断工作，确诊一例由A型魏氏梭菌病诱发哺乳仔猪猝死症的案例，现报告如下。

1 发病情况

信阳市潢川县某养猪场，成立于2000年前后，规模为300头种猪，年出栏6000头商品育肥猪左右。于2014年12月22日，向笔者反映，昨晚至今晨8时，产房不同窝中出现急性死亡8头5～7日龄哺乳仔猪，因为死亡是发生于夜间，没有发现死前症状。另在其他窝中发现4头精神不振，体温正常，但腹围增大、俯卧时四肢向腹部紧紧靠拢的疑似病猪。哺乳母猪临床表现健康，食欲旺盛，未发现异常。

2 诊断方法

2.1 病理剖检

病死猪外表可见腹围膨大，发绀，柔软，小腹部皮下水肿。打开腹腔后，发现大量肠道内容物充满整个腹腔，腥臭味严重。剖检消化系统，发现结肠处有一处破裂，肠内内容物均系此处流入腹腔。死亡8头哺乳仔猪剖检症状均有结肠破裂这种现象，其他器官未见典型病变。

根据临床和剖检症状，无法判断疾病发生根本原因。继续剖检临床上腹围膨大的活体哺乳仔猪，外表可见轻度消瘦，腹围增大，精神稍差，神智清醒，打开腹腔后，发现小肠鼓气，结肠部位靠肠系膜侧严重不规则充血，内容物鲜黄。

2.2 形态与染色镜检

无菌分别取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结及小肠等脏器组织涂片，进行革兰氏染色，并逐一镜检。记录镜检结果。

2.3 细菌分离培养

取病死猪胃、肠内容物适量接种于普通肉汤培养基中，37℃摇床培养24h。同时，将上述内脏样本匀浆后用少量灭菌生理盐水制成悬液，将组织悬液样本分别接种于普通琼脂平板和血琼脂平板上，分别37℃常规及厌氧培养24h。仅在厌氧培养结果中发现有细菌生长，挑取单个菌落转种于厌氧增菌培养基中，37℃增菌培养24h。

厌氧增菌培养基、需氧增菌培养基、血琼脂平板、葡萄糖血琼脂平板购自青岛海博生物技术有限公司。普通肉汤培养基、肉肝汤培养基、普通琼脂培养基、牛乳培养基购自杭州天和微生物制剂有限公司。产气荚膜梭菌A型、B型、C型、D型4种分型血清购自新疆生物制品厂。

图1 腹围膨大

图2 腹部潮红

图3 腹腔内充斥肠道内容物

图4 结肠袢水肿

2.4 细菌的致病性试验

取12只20g左右健康的小白鼠，分成2组。第1组6只，将37℃培养24h的纯培养物肉汤培养液分别腹腔注射接种，每只0.12ml；第2组6只，每只接种0.12ml灭菌肉汤作为对照。

2.5 细菌的鉴定

触 （涂）片、染色、镜检：取肝、脾、肾、胃、肠病料及纯培养物按常规方法制成触 （涂）片，革兰氏及瑞氏染色后镜检。生化试验：按常规方法进行生理生化特性鉴定。

2.6 血清型鉴定

将纯培养物接种于厌气肉肝汤中37℃培养8h，培养物2000r/min离心30min。分别取上清液1ml与等量的A、B、C、D4种分型血清混合，37℃作用45min，每一个血清型分别静脉注射小白鼠2只，0.14ml/只，观察24h，根据结果确定分离菌血清型。

3 结果

3.1 细菌的分离与培养特性

该菌为严格厌氧菌。将肝、肠道内容物等直接涂片瑞氏染色，可见大量两端钝圆的粗大杆菌，独立或成双排列，短链较少，无鞭毛，不能运动。革兰氏染色阳性。有的菌体中央或近端有芽孢，芽孢小于菌体横径。在血琼脂平板上可形成荚膜，无芽孢。在葡萄糖血琼脂平板上形成圆形、光滑、隆起、淡黄色、直径2～4mm的菌落，有的呈圆盘形，边缘成锯齿状。菌落周围有棕色溶血区，呈辐射状条纹。牛乳培养基中培养10h后，牛乳被酸凝，凝块呈多孔的海绵状。肉肝汤培养变得浑浊并产生大量气体。

3.2 生化试验

见附表。

3.3 致病性试验结果

注射纯培养物肉汤培养液的试验组小鼠均死亡，注射灭菌肉汤的对照组小鼠均存活。

3.4 血清学分型鉴定结果

注射等量纯培养物悬液与A型血清混合物的小白鼠正常存活，而其他小白鼠全部死亡。说明A型血清中的抗体被特异性中和，由此可以确定该猪场的病原应该是A型产气荚膜梭菌。

4 小结和讨论

经对分离菌株进行厌氧培养、生化鉴定、动物接种、血清型鉴定，同时结合流行病学调查、临床症状观察、病理剖检等措施，确定该猪场产房仔猪猝死的原因是感染A型产气荚膜梭菌。产气荚膜梭菌可分为A、B、C、D、E和F6个血清型，其中A型和C型是导致动物发生疾病的主要病原。产气荚膜梭菌对养猪业的危害贯穿猪的整个一生，可引起乳猪的红痢、梭菌性仔猪腹泻、中大猪及母猪的胀气、坏死性肠炎及猝死。

A型产气荚膜梭菌是猪肠内正常微生物区系的一部分，但其也可引起新生仔猪的肠道疾病。当产气荚膜梭菌或其芽孢被猪采食后在肠道内大量增殖，或当采食饲料过多而滞留于胃肠内，消化道蠕动不足，饲料、气候及环境突变导致猪只抵抗力下降，肠道菌群失调，使肠道内原有的产气荚膜梭菌大量繁殖而发病。产气荚膜梭菌繁殖后，产生大量气体，不能及时从肛门排出，使胃肠鼓胀，压迫心脏和肺部，导致血液循环和呼吸系统功能障碍，最终导致猪窒息死亡。

发病场作为一个运行15年的老猪场，生产设备已趋于老化，环境清洁卫生及消毒工作存在漏洞。加之近年来受行情影响，生产效益下滑，母猪淘汰减缓，部分高胎次母猪可能携带有A型产气荚膜梭菌。哺乳期间，发病仔猪其本是获得母体的病原菌，导致此次临床病情发生。

抗生素只对产气荚膜梭菌本身起作用，对其释放的毒素无任何作用，采用有效合理的预防措施的意义大于治疗。本病发生与环境卫生有直接关系，故猪舍粪便应及时清理，栏舍定期消毒。合理配制日粮，保证饲料原材料质量，禁用霉变饲料或突然更换饲料。猪场若常爆发此病，可在冬春季节，在饲料中添加甲硝唑200g/t，连喂3～5d。可起到较好预防效果。在母猪产前和产后半个月内饲料中添加酸化剂和微生态制剂，可有效缓解母猪便秘和梭菌在体内过度增殖，起到对仔猪安全保护作用。

附表 生化试验结果

苏志 （1972-)，女，大专，河南省信阳市人，中级兽医师，研究方向：动物疫病防控。