陈尚坤王旭东张晓嘉王佳琦张更谦

（1　吉林警察学院　吉林　长春　130117；2　西南政法大学　重庆　401120；3　山西医科大学　山西　太原　030001）

土壤微生物16S rDNA的T-RFLP法医学应用分析

陈尚坤1王旭东2张晓嘉3王佳琦3张更谦3

（1吉林警察学院吉林长春130117；2西南政法大学重庆401120；3山西医科大学山西太原030001）

用T-RFLP法观察不同地域土壤微生物的多态性，为法医学土壤分析提供适当的研究方法。采集自吉林和重庆两地的土壤样本，用PowerSoil®试剂盒提取土壤细菌DNA。PCR扩增16S rDNA基因的多态性区域，引物的5’端采用FAM标记。扩增产物分别用HaeⅢ，AluⅠ内切酶消化后，在3130 Genetic Analyzer电泳分离。采用主成分分析（PCA） 法和主效可加护作用可乘模型（AMMI）进行统计分析。通过采用HaeⅢ酶切后，T-RFLP法可以明确分离重庆和吉林两地的土壤样本；AluⅠ酶切后分离效果稍差。得出T-RFLP法可以区分来自不同地域的土壤样本，为法医学土壤多样性分析提供了可靠的分析方法和结论。

土壤细菌16S rDNA末端-限制性长度多态性主效可加护作用可乘模型

土壤中含有丰富的细菌、真菌、病毒等微生物，其多态性组成深度影响着土壤的性质和环境。土壤微生物在农业，环境分析等领域得到充分的重视和研究。土壤微生物的多态性表现为地域、时间、土壤性质、环境影响等方面。土壤中的众多微生物至今未在实验室成功培养，例如土壤中的细菌有95%～98%未能在实验室成功培养。因此，通过其多态性集中的DNA区域如16S rRNA、18S rRNA基因等去分析土壤的宏基因组。近年来，法医也越来越重视土壤微生物分析［1］。相关的探索领域包括微生物的个体识别，土壤细菌的改变与死亡时间的关系等［2］。……