孟凡达 霍卫松 贺美琳 李昊 廉 洁 石西增 高云华

摘 要 研制出一种以时间分辨荧光微球作为标记，自驱动快速检测HFABP的荧光免疫微流体测试卡。利用激光切割法在双面胶上简便、快速地切割出所设计的微通道结构，并采用激光切割法制作出聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）测试卡底板及上盖。使用提拉涂膜的方法在PMMA底板表面修饰马来酸酐官能团，有效地解决了捕获抗体在PMMA表面的固定问题。使用等离子体处理测试卡上盖改善其亲水性，使液体能够在微通道内自行流动。使用此测试卡可以实现对心型脂肪酸结合蛋白（HFABP）的快速检测，线性检测范围为0.5～100 ng/mL，检出限为0.1 ng/mL（S/N=3），检测时间少于10 min，批内相对标准偏差（RSD）<10%，批间RSD<15%。本方法具有灵敏度高、检测时间短、结果准确等优点，可以满足临床检测的需求，具有良好的应用前景。

关键词 心型脂肪酸结合蛋白； 检测； 微流体； 时间分辨荧光

1 引 言

微流控技术的发展为蛋白的快速及其高通量的检测提供了一个新的思路及平台[1～6]，并且大大降低了检测成本。与传统的分析方法相比，微流体检测具有高效、快速、试剂消耗少、自动化等优点。目前，用于制作微通道的材料主要有单晶硅、无定形硅、玻璃、石英、高分子聚合物，如环氧树脂、聚脲、聚氨、聚苯乙烯（PS）和聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）以及聚二甲基硅氧烷（PDMS）等[7～10]。高分子聚合物相比于无机材料具有种类多、价格低廉、加工方法多种多样以及容易实现批量生产等优势，已成为制作微流体芯片的首选材料。其中PMMA因其出色的光学性能、良好的加工特性、生物亲和性好等优点而被广泛用于体外诊断领域[11]。……