张晓娜，李武平，徐修礼，惠 娜，陈晓华，丁敬美



不同pH值酸性氧化电位水对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外灭菌活性的研究

张晓娜，李武平，徐修礼，惠 娜，陈晓华，丁敬美

[目的]观察不同pH值酸性氧化电位水对临床分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外灭菌活性。[方法]采用悬液杀菌实验，对不同pH值酸性氧化电位水和苯扎溴铵作用不同时间的杀菌效果进行实验检测。[结果]苯扎溴铵组、pH值<3.0的酸性氧化电位水、pH值4.0～5.0的酸性氧化电位水和pH值6.0～7.0的酸性氧化电位水作用1 min、3 min和5 min后杀菌率均为100%。[结论]不同pH值酸性氧化电位水与苯扎溴铵对MRSA的灭菌效果一致， 因苯扎溴铵抗菌谱窄，本研究推荐酸性氧化电位水用于多重耐药菌感染创面、伤口及物体表面的消毒。

酸性氧化电位水；pH值；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；灭菌

酸性氧化电位水(electrolyzed oxidizing water，EOW)具有较强的杀菌作用，目前主要应用于医疗卫生和食品加工行业的冲洗消毒，可杀灭沙门氏菌、李斯特菌属，亦可杀灭乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒以及部分真菌等[1]，但对于临床多重耐药菌的杀灭鲜有报道；有文献显示，酸性氧化电位水的低pH值对物体表面有腐蚀作用，同时会使有效氯较快的散失，从而降低杀菌效率，使杀菌效果不稳定，而偏中性的酸性氧化电位水不仅可以弥补这一缺点，同时也具有较好的杀菌作用[2]。本研究主要探讨不同pH值酸性氧化电位水对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus，MRSA)的杀灭作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料

政府雇员虽为雇员，但仍然对外代表国家利益，因而他们必须与公务员一样具备对公权力行使的敬畏，必须自觉维护公共利益，必须牢固树立无私奉献的坚定信念。但他们也是人，他们身上同样有可能存在“私心”和攫取“私利”的行为，他们所具备的双重角色有可能使他们为一己的私利而有失公平正义，甚至导致以权寻租。这是政府雇员在满足短期需要时要特别需要注意的。政府在这方面应有长远的眼光，要有风险意识，且尽量避免。

1.1.1 菌株来源 10株MRSA均来自临床感染标本(6株来自呼吸道，4株来自分泌物)； MRSA鉴定采用CLSI推荐的头孢西丁(FOX)纸片扩散法(K-B法)，按CLSI 2010标准，FOX药片抑菌环直径≤21 mm判断为MRSA。

1.1.2 实验设备及试剂 酸性氧化电位水生成器(日本圣太科，规格型号SONTECH-1000)；SX-610型笔式pH计和ORP检测笔(上海三信仪表厂)；麦氏比浊仪(生物梅里埃公司，型号DensiCHEK)；XK96-A快速混匀仪(姜堰市新康医疗器械有限公司)；有效氯试纸(广州绿洲生化科技股份有限公司)；苯扎溴铵(河北建宁药业有限公司，批号：20140403)；卵磷脂(天津市光复精细化工研究所，批号：20130802)；3%吐温80(天津市富宇精细化工有限公司，批号：20130117)；磷酸盐缓冲液(北京中杉金桥技术有限公司)；硫代硫酸钠(天津欧博凯化工有限公司，批号：20140305)；胰蛋白胨大豆肉汤培养基(北京奥博星生物技术有限公司，批号：20140101)。

子宫内膜异位症恶变倾向的临床诊断：①卵巢内异症囊肿过大，直径>10 cm 或短期内增大明显者；②绝经后妇女卵巢新发异位包块或原异位包块增大或绝经 1 年以上原异位包块仍不缩小者；③盆腔疼痛节律及性质改变，痛经加重或持续性腹痛；④影像学提示卵巢囊肿为囊实性肿物，其内可见乳头，彩超提示病灶血流丰富，阻力低；⑤血清 CA125水平异常升高>200 KU/L(除外子宫腺肌病及感染)。

1.2.4.1 中和剂实验 试验菌为MRSA，根据《消毒技术规范2002》分为6组，悬液试验在1×107cfu/mL～5×107cfu/mL之间，其组间菌落数误差率应不超过15%。实验重复3次，结果符合条件则确认所选择的中和剂符合要求。

周大娘也一定知道金枝赚到钱了，因为每个新来的第一次“赚钱”都是过分的羞恨。羞恨摧毁她，忽然患着传染病一般。

1.2.2 菌液的制备 试验菌接种至胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)，37 ℃培养24 h，用磷酸盐缓冲液洗下培养物，采用麦氏比浊仪制备菌悬液，配制为0.5麦氏单位菌悬液，稀释至1.0×105cfu/mL～1.5×105cfu/mL。

1.2.4 杀菌实验

1.2.3 实验分组 根据不同pH值将酸性氧化电位水分为3组，A组pH值<3.0，B组pH值4.0～5.0，C组pH值6.0～7.0，再加苯扎溴铵组以及空白对照生理盐水组共5组。

1.2.1 不同pH值酸性氧化电位水的制备与监测 酸性氧化电位水主要在特制离子膜电解槽中加一定量氯化钠并在一定电流密度下电解产生，阳极电解出的为常用酸性氧化电位水(pH<3.0)，阴极电解出的为碱性氧化电位水，用来中和酸性氧化电位水。而偏中性氧化电位水主要是在酸性氧化电位水基础上产生的一种高效消毒剂，它的制备方法主要有两种：一种是在无隔膜电解槽中电解氯化钠所得；一种是在两槽型离子膜电解槽中电解氯化钠溶液，电解结束后将阳极电解产物导向阴极，与阴极电解液混合，得到偏中性氧化电解水[3-4]。本研究采用第2种方法。pH值用SX-610型笔式pH计测试，校对完成用纯水清洗电极并擦干，将电极插入待测溶液中，搅动后静止放置，待显示值稳定后读数；氧化还原电位(ORP)值用ORP检测笔测试，步骤同pH计测试法；有效氯用试纸测试，酸性氧化电位水现配现用。

1.2 试验方法

1.2.4.2 悬液杀菌实验 将配制好的菌液取1 mL分别加入到不同的pH值酸性氧化电位水9 mL，即不同pH值酸性氧化电位水组，作用1 min、3 min、5 min；取0.5 mL混悬液加入4.5 mL的中和剂混匀，中和10 min，根据需要稀释后取0.1 mL接种平板，37 ℃培养48 h，进行活菌培养计数，计算杀菌率，每组重复3次。对照组即生理盐水组和苯扎溴铵组，操作步骤同试验组。

(4)实现三级站及综合测试台质检数据的共享与集成，通过数据的对比统计，提高质量管理的整体分析能力。质量管理部门发现质量问题后，需要进行追溯，但由于难以通过信息系统获取到三级站的原辅料检验数据，需要人工进行对应，很多情况下，这项工作实际上难以有效开展。质量管理部门和三级站的工作实际上是密不可分的：质量管理部门负责生产过程的质量控制和提升，因此需要将自己所采集的过程监控数据与三级站的成品检测数据合并起来进行分析。目前，需要花费大量人工对两部分数据进行对应和分析，影响了质量管理和改进的工作效率。

2 结果

2.1 不同pH值酸性氧化电位水的理化性质 3组不同pH值酸性氧化电位水的理化性质检测结果见表1。

除了革命资历不够的因素以外，蒋介石凭借军事实力跻身高位，并用暴力手段压制党内各派势力，这样的军事领袖形象限制了其在党义问题上发挥的空间。在老同志眼中，“他仍被认为军事的，而非政治的人物”⑦;而对于基层的许多信仰孙中山主义且怀有革命理想的年轻党员，蒋介石的言论没有任何吸引力。

1.2.5 统计学方法 杀菌率=(A-B)/A×100%，A为灭菌前菌落计数，B为灭菌后菌落计数；数据采用SPSS 19.0进行统计分析，P<0.05为差异有统计学意义。

表1 不同pH值酸性氧化电位水的理化性质

2.2 中和剂实验结果 实验结果表明：用0.3%卵磷脂和3%吐温80的磷酸盐缓冲液可以有效中和苯扎溴铵的残留作用，用0.5%的硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液可以有效中和酸性氧化电位水的残留作用，且两种中和剂及中和产物对试验菌和培养基均无影响。

2.3 杀菌实验结果 实验组在作用1 min、3 min、5 min后，以pH值<3.0(A组)为例计数菌落，结果见表2。苯扎溴铵组、pH值4.0～5.0的酸性氧化电位水(B组)、pH值6.0～7.0的酸性氧化电位水(C组)在作用1 min、3 min、5 min后亦均无细菌生长。说明不同pH值酸性氧化电位水对MRSA的杀菌率均为100%。

表2 生理盐水组及A组作用不同时间的菌落计数 cfu/mL

3 讨论

MRSA是医院感染的重要病原菌，自1961年首次发现MRSA以来[5]，MRSA分离率逐年增加，成为医院感染重要的革兰阳性细菌，多重耐药现象日益严重，成为临床亟待解决的问题，所以提供更多选择的消毒剂成为必然。近年来广泛应用于食品加工行业和医疗行业[6]的酸性氧化电位水具有较好的杀菌效果，它又称氧化电位水，是20世纪90年代由日本研制的一种新型消毒水。

3.1 酸性氧化电位水的杀菌机制 酸性氧化电位水是将加入低浓度氯化钠的自来水在有离子隔膜电解槽中电解后，从阳极生成的一种酸性消毒剂，具有高氧化还原电位(ORP>1 100 mV)、强酸(pH<3.0)、有效氯含量50 mg/L～70 mg/L，足以破坏微生物的生存环境，使微生物细胞膜电位发生改变，导致细胞膜通透性增加，细胞肿胀、裂变，细胞内容物溢出以及超微结构改变，最终使细菌灭活[7-8]。酸性氧化电位水应用广泛，主要用于消毒食品加工设备，灭活生鲜农产品的病原菌等；也用于医疗器械的冲洗消毒，如内镜消毒、牙科器械消毒等，不但杀菌效果好，在与环境接触一段时间后还原为普通水，对环境无污染，且价格低廉容易获取。

3.2 不同pH值酸性氧化电位水的杀菌效果 本研究结果显示：苯扎溴铵与酸性氧化电位水在作用1 min、3 min、5 min杀菌率均为100%。这与文献报道苯扎溴铵在1 min内可杀灭MRSA一致。说明不同pH值酸性氧化电位水与苯扎溴铵对MRSA的杀灭作用一致，但是苯扎溴铵杀菌谱窄，对某些革兰阴性菌的作用差，对结核杆菌和细菌芽孢基本无效。而酸性氧化电位水可杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，还可灭活乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒，同时再作用一定时间还可以灭活细菌芽孢。因此，酸性氧化电位水可在临床广泛应用，本研究结果还表明pH值并不是其酸性氧化电位水杀菌的主要成分，其杀菌作用是有效氯、pH值、ORP协同作用的结果，有效氯主要以Cl2、HClO和ClO-形式存在，其中HClO是主要的杀菌成分，在反应过程中可产生活性羟基，对细菌的核酸、蛋白和代谢酶具有分解灭活作用； ORP可破坏微生物电环境，二者协同最终使细菌灭活。

表2为不同施钾肥处理对甜玉米品质的影响，施用钾肥显著增加了甜玉米果实中硝酸盐、可溶性糖和可溶性蛋白的含量，与NP处理相比，增幅分别为 2.7%～29.9%、7.8%～21.5%和 11.0%～15.4%，等施钾量条件下，100%CF处理果实中硝酸盐含量高于其他施钾处理，增幅为 12.4%～26.4%。 30%OF＋70%CF处理果实中可溶性糖含量略高于其他施钾处理，增幅为4.6%～12.8%。不同施钾处理果实中可溶性蛋白含量无明显差异。

3.3 酸性氧化电位水的临床应用 酸性氧化电位水因其杀菌高效、作用迅速、安全无毒、绿色环保的优点广泛用于临床。但有文献显示用酸性氧化电位水洗手后不进行皮肤保养，连续5 d，皮肤会出现轻度干燥、红斑等损害现象[9]；也有文献显示因其较低的pH值，会对铜、铝、碳钢有中度腐蚀作用[10]，会缩短金属材料器械的寿命，增加医疗成本；同时低pH值易使有效成分氯气散失，降低杀菌效率。而偏中性氧化电位水，在保存其优点的同时，又因pH值接近中性，对物体、皮肤、黏膜表面无腐蚀性，可用于口腔、皮肤、溃疡、伤口、感染创面的清洗消毒，减轻病人不适感；也可用于精密仪器的消毒，减少腐蚀，延长使用寿命。偏中性氧化电位水pH值偏高，为保持化学稳定，其H+浓度会减少，其有效成分会转化为稳定的次氯酸，不易挥发，保证其杀菌效果[2]。另外，克服了酸性氧化电位水的缺点，偏中性氧化电位水应用更加广泛，为使酸性氧化电位水方便易取，可建立楼宇系统，用于空气、物体表面、手和各类创面、黏膜的消毒，因此，本研究推荐将pH值在6.0～7.0之间的酸性氧化电位水作为常用消毒剂应用于临床。

以往研究仅分别探讨强酸性氧化电位水或偏中性氧化电位水的杀菌作用，对两者的比较研究较少，而本研究设立3种不同pH值酸性氧化电位水，更加全面；同时与临床常用消毒剂苯扎溴铵进行对比，更加系统、科学。通过严谨的实验研究，结果显示不同pH值酸性氧化电位水对MRSA具有良好的杀菌效果，为临床应用偏中性氧化电位水提供理论依据。而对临床其他耐药菌株，如耐万古霉素肠球菌(VRE)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)等多重耐药菌的杀菌效果需要进一步探讨。

[1] QuanY,Choi K,Chuang D，etal.Evaluation of bactericidal activity of weakly acidic electrolyzed water(WAEW)against Vibrio vulnificus and Vibrio parahaemolyticus[J].International Journal of Food Microbiology,2010,136(3)：255-260.

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[3] Tamaki S,Bui VN,Ngo LH,etal.Virucidal effect of acidic electrolyzed water and neutral electrolyzed water on avian influenza viruses[J].Archives of Virology，2014,159(3)：405-412.

[4] 朱玉婵,任占冬，陈红梅，等.中性氧化电解水杀菌剂制备新工艺及杀菌作用[J].农药,2010,49(12):889-891;894.

[5] 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染防治专家委员会.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染防治专家共识2011年更新版[J].中华实验和临床感染病杂志(电子版),2011,5(3):372-384.

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[9] 王燕,钱培芬.微酸性电解水用于手消毒的效果观察[J].护理学杂志,2014,29(5):4-5.

[10] 覃迪生,文学锦，陈桂英,等.酸性氧化电位水用于口腔综合治疗台水路消毒的研究[J].广西医科大学学报,2014,31(5)：805-806.

(本文编辑李亚琴)

Research on vitro bactericidal activity of different pH electrolyzed oxidizing water(EOW) for methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Zhang Xiaona,Li Wuping,Xu Xiuli,et al

(Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Shaanxi 710032 China)

张晓娜，硕士研究生在读，单位：710032，中国人民解放军第四军医大学西京医院；李武平(通讯作者)、徐修礼、惠娜、陈晓华、丁敬美单位：710032，中国人民解放军第四军医大学西京医院。

R472

B

10.3969/j.issn.1009-6493.2016.31.037

1009-6493(2016)11A-3956-03

2015-08-26；

2016-08-14)

引用信息 张晓娜，李武平，徐修礼，等.不同pH值酸性氧化电位水对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外灭菌活性的研究[J].护理研究，2016，30(11A)：3956-3958.