赵 越，张莉滟，陈 莲，叶倩君

(1 广东省医学科学院 广东省人民医院，广东 广州 510080； 2 广州中医药大学附属骨伤科医院，广东 广州 510240； 3 广州医科大学金域检验学院，广东 广州 510182)



·论著·

临床常见分离菌对不同配比头孢哌酮/舒巴坦的药敏差异

赵 越1，张莉滟1，陈 莲2，叶倩君3

(1 广东省医学科学院 广东省人民医院，广东 广州 510080； 2 广州中医药大学附属骨伤科医院，广东 广州 510240； 3 广州医科大学金域检验学院，广东 广州 510182)

目的 了解临床常见病原菌对不同配比头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的耐药性，为临床合理选择头孢哌酮/舒巴坦提供依据。方法 收集某院2014年上半年临床分离病原菌1 141株，采用纸片扩散法检测不同病原菌对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片(70/35 μg与75/75 μg)的抗菌活性。结果 1 141株病原菌中肠杆菌科细菌675株(59.16%)，非发酵菌447株(39.18%)，其他革兰阴性杆菌19株(1.66%)。对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片(70/35 μg、75/75 μg)的耐药率：超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性大肠埃希菌(eco，221株)分别为7.69%、2.26%,肺炎克雷伯菌(kpn，92株)分别为10.87%、3.26%；亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB 295株)分别为54.92%、11.19%；两种药敏纸片抗菌活性比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。ESBLs阴性肠杆菌科细菌(eco，135株；kpn，98株)、亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(51株)、铜绿假单胞菌(48株)、嗜麦芽窄食单胞菌(22株)对两种头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的耐药率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 ESBLs阳性肠杆菌科细菌与IRAB对不同配比头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的抗菌活性具有差异，临床治疗此类细菌引起的感染时要充分考虑头孢哌酮/舒巴坦的剂型，以达到预期治疗效果。

头孢哌酮/舒巴坦； 超广谱β-内酰胺酶； ESBLs； 肠杆菌科细菌； 亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌； 纸片扩散法； 耐药性； 抗药性，微生物； 合理用药

[Chin J Infect Control，2016，15(10)：744-747]

现代临床医疗中随着抗菌药物的大量应用，超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性大肠埃希菌(eco)与肺炎克雷伯菌(kpn)、产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌、多重耐药铜绿假单胞菌、泛耐药鲍曼不动杆菌等日趋增多，及时有效控制并治愈其引起的感染刻不容缓[1-2]。头孢哌酮/舒巴坦(cefoperazone/sulbactam，SCF)是第三代头孢菌素头孢哌酮与酶抑制剂舒巴坦的复合制剂，两者合用可出现协同效应，临床注射药头孢哌酮/舒巴坦主要有两种配比[3]，近年来已被广泛应用于对β-内酰胺类抗生素耐药的病原菌，尤其是针对革兰阴性菌所引起的中重度感染患者的治疗[4]。药敏试验中头孢哌酮/舒巴坦有70/35 μg与75/75 μg两种药敏纸片，本文旨在研究临床常见病原菌对两种头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的耐药性，为临床针对性选择不同剂型提供依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集本院2014年上半年不同标本分离革兰阴性杆菌共1 141株(已剔除重复菌株)，其中肠杆菌科细菌675株，以eco (356株)和kpn (190株)为主；非发酵菌447株，以鲍曼不动杆菌(aba，346株)、铜绿假单胞菌(pae，48株)为主；其他革兰阴性杆菌19株。

1.2 试剂与仪器 M-H琼脂培养基购自广州市迪景微生物科技有限公司，头孢哌酮/舒巴坦 70/35 μg与75/75 μg药敏纸片均为OXOID公司产品。本研究所用菌株均采用法国生物梅里埃VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪与其配套试剂鉴定。

1.3 质控菌株 大肠埃希菌ATCC 25922和阴沟肠杆菌ATCC 700323由法国生物梅里埃公司提供。

1.4 菌株复活与药敏试验 菌株用哥伦比亚血琼脂培养基进行复苏并传代，药敏试验依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)需氧菌纸片扩散药敏法(M02-A11)标准[5]进行，同一菌株分别贴两种头孢哌酮/舒巴坦纸片,置于35 °C，5%CO2培养箱中培养18～24 h，检测菌株抑菌环直径大小并记录。药敏折点值参照食品药品监督管理局(FDA)批准的头孢哌酮折点值：≤15 mm为耐药，16～20 mm为中介，≥21 mm为敏感。ESBLs通过VITEK 2 AST-GN13卡中的ESBLs反应孔检测，该反应孔中含有药物浓度分别为头孢吡肟1 μg/mL，头孢噻肟0.5 μg/mL，头孢他啶0.5 μg/mL，头孢吡肟/克拉维酸1/10 μg/mL，头孢噻肟/克拉维酸0.5/4 μg/mL，头孢他啶/克拉维酸0.5/4 μg/mL，确证试验根据CLSI的纸片扩散法进行[6]。

1.5 数据分析 应用WHONET 5.6软件与SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，采用χ2检验进行分析，P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ESBLs阳性肠杆菌科细菌药敏结果 ESBLs阳性肠杆菌科细菌(其中eco 221株，kpn 92株)对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片的耐药率：70/35 μg、75/75 μg分别为8.63%、2.55%，两种药敏纸片的抗菌活性比较，差异有统计学意义(P<0.05)。对70/35 μg和75/75 μg药敏纸片的耐药率：ESBLs阳性eco、kpn分别为7.69% VS 2.26%,10.87% VS 3.26%，两种药敏纸片的抗菌活性比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

2.2 ESBLs阴性肠杆菌科细菌药敏结果 ESBLs阴性肠杆菌科细菌(其中eco 135株，kpn 98株)对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片的耐药率：70/35 μg和75/75 μg分别为9.44%与8.58%，抗菌活性差异无统计学意义(P>0.05)。ESBLs阴性eco对70/35 μg和75/75 μg药敏纸片的耐药率分别为2.22%、2.22%，ESBLs阴性kpn的耐药率分别为19.39%、17.35%，两种菌对不同配比药敏纸片的耐药率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

2.3 非发酵细菌 447株非发酵细菌中，亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(IRAB)295株，亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌(ISAB)51株，铜绿假单胞菌(pae)48株，嗜麦芽窄食单胞菌(pma)22株。IRAB对头孢哌酮/舒巴坦70/35 μg纸片和75/75 μg纸片的耐药率分别为54.92%和11.19%，两种不同配比头孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差异有统计学意义(P<0.05)。ISAB、pae、pma对两种不同配比头孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 常见临床分离菌对不同配比头孢哌酮/舒巴坦纸片的药敏检测结果(%，株)

Table 1 Susceptibility testing result of different ratios of cefoperazone/sulbactam to clinically isolated pathogens(%, No. of isolates)

病原菌头孢哌酮/舒巴坦(70/35μg)RIS头孢哌酮/舒巴坦(75/75μg)RISχ2#P#χ2*P*肠杆菌科细菌 ESBLs阳性8.63(27)20.12(63)71.25(223)2.55(8)8.63(27)88.82(278)14.000.0030.240.00 eco7.69(17)13.12(29)79.19(175)2.26(5)5.88(13)91.86(203)7.990.0114.320.00 kpn10.87(10)36.96(34)52.17(48)3.26(3)15.22(14)81.52(75)6.90.0117.880.00 ESBLs阴性9.44(22)3.43(8)87.13(203)8.58(20)1.29(3)90.13(210)0.160.691.040.31 eco2.22(3)3.70(5)94.08(127)2.22(3)0(0)97.78(132)0.001.002.370.12 kpn19.39(19)3.06(3)77.55(76)17.35(17)3.06(3)79.59(78)0.140.710.120.73非发酵细菌 IRAB54.92(162)42.71(126)2.37(7)11.19(33)52.88(156)35.93(106)170.770.00107.280.00 ISAB1.96(1)7.84(4)90.20(46)0(0)1.96(1)98.04(50)-0.49a1.590.21 pae16.67(8)6.25(3)77.08(37)12.50(6)6.25(3)81.25(39)0.340.560.250.62 pma54.55(12)27.27(6)18.18(4)54.55(12)27.27(6)18.18(4)0.001.000.001.00

#：不计中介株，仅对耐药株与敏感株进行分析；*：将中介株与耐药株归为非敏感株，对非敏感株与敏感株进行统计分析；a :采用Fisher 精确概率法

3 讨论

近年来，随着抗菌药物的大量使用，细菌耐药率逐年升高，因此产酶抑制剂在感染性疾病的治疗过程中被广泛应用，尤其是头孢哌酮/舒巴坦在临床治疗革兰阴性菌所引起的中重度感染时备受青睐。目前，实验室对头孢哌酮/舒巴坦进行体外药敏试验时通常采用105(70/35 μg)与150(75/75 μg)两种药敏纸片，后者含有舒巴坦剂量为前者的2.14倍。采用K-B法对病原菌进行体外药敏试验，不同病原菌对两种不同配比抗菌药物的耐药性是否存在差异，鲜有文献报道。

本研究中ESBLs阳性肠杆菌科细菌(eco、kpn)和IRAB对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片的耐药率比较，差异有统计学意义，可能因为舒巴坦与β-内酰胺酶形成不可逆结合，从而强效抑制β-内酰胺酶,这种保护作用使头孢哌酮的β-内酰胺环逃逸β-内酰胺酶分解,从而产生强大的抗菌活性[7]；其还可与青霉素结合蛋白(PBP)结合，避免由PBP与抗菌药物亲和力下降引起的耐药[4]。舒巴坦对不动杆菌属细菌具有抗菌作用，故头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌拥有良好的抗菌活性和直接杀灭作用，所以需要选用含有足够剂量舒巴坦的复合制剂治疗鲍曼不动杆菌引发的感染[8-9]。对于一般感染，国内舒巴坦应用剂量≤4 g/d，而国外对于治疗多重耐药不动杆菌属细菌的剂量可达6～8 g/d[10-11]。 舒巴坦对产不同类型酶的鲍曼不动杆菌(如广泛耐药与非广泛耐药鲍曼不动杆菌)效果不同，ESBLs亦存在不同的基因型，因此两种配比头孢哌酮/舒巴坦对不同ESBLs基因型菌株的抗菌活性是否存有差异还需进一步研究[12]。

本研究中ESBLs阴性肠杆菌科细菌、亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等其他病原菌对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片的抗菌活性差异无统计学意义，说明两种配比头孢哌酮/舒巴坦纸片对不同类别细菌的抗菌活性不同，临床要区别对待不同种属细菌感染，合理选择抗菌药物。ESBLs阳性肠杆菌科细菌和多重耐药鲍曼不动杆菌实验室有必要选用不同配比头孢哌酮/舒巴坦进行药敏试验，其他菌株需与临床进行沟通后再决定。

综上所述，在检测ESBLs阳性eco和kpn、多重耐药鲍曼不动杆菌等耐药菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药性时，应当在药敏检测报告中加注所选用头孢哌酮/舒巴坦配比情况，正确指导临床用药，达到预期治疗效果，遏制耐药菌的广泛播散。

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(本文编辑：豆清娅)

Difference in antimicrobial susceptibility of common clinical pathogens to different ratios of cefoperazone / sulbactam antimicrobial disks

ZHAOYue1,ZHANGLi-yan1,CHENLian2,YEQian-jun3

(1GuangdongAcademyofMedicalSciences/GuangdongGeneralHospital,Guangzhou510080,China; 2AffiliatedOrthopedicHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510240,China; 3KingMedDiagnosticsInstituteofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510182,China)

Objective To understand the antimicrobial resistance of common clinical pathogens to antimicrobial disks containing different ratios of cefoperazone/sulbactam, so as to provide basis for rational application of cefoperazone /sulbactam in clinic. Methods 1 141 pathogens isolated from clinical specimens in a hospital in the first half year of 2014 were collected, disk diffusion method was adopted to detect antimicrobial activity of two kinds of cefoperazone/sulbactam disks (70/35 μg and 75/75 μg).Results Of 1 141 pathogenic strains, 675 (59.16%)were Enterobacteriaceae, 447 (39.18%) were non-fermentative bacteria, and 19 (1.66%) were other gram-negative bacilli. Resistance rates of pathogens to 70/35μg and 75/75 μg cefoperazone /sulbactam antimicrobial disks were as follows: extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)-producingEscherichiacoli(n=221) were 7.69% and 2.26% respectively, ESBLs-producingKlebsiellapneumoniae(n=92) 10.87% and 3.26% respectively, imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii(IRAB,n=295)54.92% and 11.19%respectively；there were significant differences in antimicrobial activity between two ratios of antimicrobial disks(P<0.05). While antimicrobial resistance rates of ESBLs-negativeEnterobacteriaceae(Escherichiacoli,n=135;Klebsiellapneumoniae,n=98), imipenem-sensitiveAcinetobacterbaumannii(ISAB,n=51),Pseudomonasaeruginosa(n=48 ), andStenotrophomonasmaltophilia(n=22) were not significantly different (allP>0.05). Conclusion Antimicrobial activity of two different ratios of cefoperazone/sulbactam antimicrobial disks to ESBLs-producing Enterobacteriaceae and IRAB is different, attention should be paid to ratios of cefoperazone/sulbactam during the treatment , so as to achieve the desired therapeutic effect.

cefoperazone/sulbactam; extended-spectrum β-lactamase; ESBLs； Enterobacteriaceae; imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii; disk diffusion method; drug resistance; drug resistance, microbial; rational antimicrobial use

2015-12-24

赵越(1987-)，男(汉族)，黑龙江省牡丹江市人，检验师，主要从事临床微生物检验研究。

张莉滟 E-mail:zlycml@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2016.10.006

R181.3+2

A

1671-9638(2016)10-0744-04