刘晶晶 程春玲 席玉珍 魏书

（安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室，合肥 230036）

烟草NtWRKY40在植物应答病毒侵染过程中的作用

刘晶晶 程春玲 席玉珍 魏书

（安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室，合肥 230036）

WRKY转录因子家族在植物的抗病、抗逆反应中具有重要功能。已有研究表明，烟草花叶病毒（TMV）的侵染显著地诱导烟草NtWRKY的表达，有必要进一步探明该基因在植物应答病毒侵染过程中的作用。采用PCR的方法克隆获得NtWRKY cDNA，生物信息学分析结果显示，该基因属于WRKY Ⅱa 亚族成员，与绒毛状烟草NtoWRKY40高度同源，命名为NtWRKY40。以此建立了过表达该基因的转基因烟草，并以TMV为毒源进行了转基因烟草和野生烟草的侵染实验，以观察NtWRKY40在烟草应答病毒侵染过程中的作用。实验结果表明，野生烟草在TMV侵染后9 d，NtWRKY40的表达量显著升高，而NtWRKY40过表达转基因烟草在病毒侵染后，病毒相关基因的表达高于野生型对照，与染病程度成正相关，说明过表达NtWRKY40增加了植株对病毒的敏感性，该基因为负调控因子。此外，为探索应用人工miRNA的抗病毒技术，以烟草天然miR167前体为骨架、马铃薯Y病毒（PVY）外壳蛋白基因的一段反向互补序列为成熟序列，构建了amiR167-PVY植物表达载体并转化烟草，以抑制PVY。对amiRNA转基因植株进行抗病毒实验的结果显示，amiR167-PVY能够部分抑制病毒基因的表达，转基因植株具有一定的抗病毒能力。

烟草花叶病毒；马铃薯Y病毒；WRKY转录因子；人工miRNA；抗病毒

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.10.023

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）和马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）均为RNA病毒，寄主广泛，可危害烟草、马铃薯、番茄和辣椒等多种茄科作物，造成巨大经济损失［1］。……