邵晓青，吕　申，冯　璐，李　梅

(1.大连医科大学附属第二医院 科研中心，辽宁 大连 116027；2.大连医科大学附属第一医院 病理科，辽宁 大连 116011)



三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量PCR应用中的比较

邵晓青1，吕申1，冯璐2，李梅1

(1.大连医科大学附属第二医院 科研中心，辽宁 大连 116027；2.大连医科大学附属第一医院 病理科，辽宁 大连 116011)

目的探讨定量PCR中三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen定量效果的差异。方法以三个样品基因组DNA为模板，应用巢氏PCR法先扩增G6PDH大片段，纯化回收产物，定量，并分别以10倍、5倍和2倍倍比稀释，作为定量PCR制作标准曲线的模板。应用real-time PCR仪指定试剂盒检测模板质量，再分别以含有相同Taq酶并分别含有SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen染料的试剂进行小片段定量PCR扩增，每个浓度3复孔。标准曲线拟合，结果分析用仪器自带分析软件完成。结果应用三种荧光染料获得的标准曲线回归系数≥0.98(除1个样品为0.97)，10倍、5倍梯度稀释标准曲线PCR效率为0.8～1.0，2倍稀释标准曲线PCR效率应用SYBR GreenⅠ有2/3样品>1.2，而后两种染料为0.9～1.2。应用SYBR GreenⅠ较另两种染料的标准曲线误差较大，且样品间分散度也较大。结论在定量PCR中饱和染料LC Green PLUS、EvaGreen的定量效果好于SYBR GreenⅠ。

定量PCR；SYBR GreenⅠ；LC Green PLUS；EvaGreen

[引用本文]邵晓青，吕申，冯璐，等.三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量PCR应用中的比较[J].大连医科大学学报，2016,38(5)：428-431.

实时定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)是重要的生物、医学研究方法之一，广泛应用于mRNA、miRNA等基因表达定量分析，基因拷贝数变异(CNV)分析，线粒体DNA检测，基因甲基化分析，异源基因检测等[1-2]。探针法和染料法是进行实时定量PCR定量分析的两种基本方法。探针法虽然定量分析相对敏感，但荧光探针设计较复杂，依据目的片段序列不同有时需要设计多条探针进行条件优化，另外探针合成费用较高，探针保存条件要求比较严格。染……