张瑞丽 王千秋

214002无锡，南京医科大学附属无锡市第二人民医院皮肤科（张瑞丽）；中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所临床性病防治室（王千秋）

梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47通过RhoA/ROCK信号通路调控血管内皮细胞通透性

张瑞丽 王千秋

214002无锡，南京医科大学附属无锡市第二人民医院皮肤科（张瑞丽）；中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所临床性病防治室（王千秋）

目的 探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。方法 用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）构建细胞单层模型，重组蛋白Tpp47（rTpp47）直接与HUVEC单层模型混合培养，或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处理后再用rTpp47刺激HUVEC单层模型，以煮沸灭活的rTpp47处理HUVEC单层模型为阴性对照组，采用ELISA检测各组培养1、4 h时辣根过氧化物酶（HRP）流量，培养12 h用荧光染料罗丹明-鬼笔环肽染色细胞骨架系统，共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F肌动蛋白排列变化。用Western印迹检测rTpp47与煮沸灭活的rTpp47分别处理HUVEC单层模型后细胞RhoA的表达水平。结果 rTpp47刺激HUVEC单层模型1 h时HRP流量（0.81±0.10）高于阴性对照组（0.39±0.09），差异有统计学意义（P＜0.05），而此时Y-27632预处理组HRP流量（0.51±0.10）与单用rTpp47刺激组及阴性对照组相比，差异无统计学意义（均P＞0.05）。培养4 h时，单用rTpp47刺激组HRP流量显著增加（2.31±0.14），且高于Y-27632预处理组（1.21±0.12）及阴性对照组（0.73±0.12），差异有统计学意义（均P＜0.05），而Y-27632预处理组与阴性对照组之间差异无统计学意义。rTpp47刺激HUVEC后，与煮沸灭活的rTpp47作用HUVEC相比，细胞中RhoA表达增加。同时，rTpp47刺激细胞中骨架蛋白F肌动蛋白重排，在胞质中形成应力纤维，抑制剂Y-27632可部分抑制F肌动蛋白重排。……