王雪 李海全 肖香 李霞 黄宇 谭林/四川省北川羌族自治县农业局

北川白山羊两例肺炎支原体PCR检测及药敏实验

王雪 李海全 肖香 李霞 黄宇 谭林/四川省北川羌族自治县农业局

羊支原体性肺炎（Mycoplasma ovipneumoniae MO），在我国四川、甘肃等省区，从具有类似山羊传染性胸膜肺炎症状和病理变化的绵羊和山羊中分离到本病原并经过与国际标准菌株Y98对型，鉴定为绵羊肺炎支原体。本病常呈地方性流行，在北川县呈流行趋势，影响到养羊业正常生产与发展。

2016年6月，北川县某白山羊场未经申报审批私自从山东省某羊场引进1只波尔山羊种羊，引进10天后，该场山羊陆续出现咳嗽、消瘦、流浆液性鼻漏等症状，后陆续出现死亡，我中心技术人员到达现场后，病羊呼吸困难，眼险肿胀，剖检2头病羊，肺两侧对称性肉变，呈浅粉灰色，肺间质增生炎。胸腔有淡黄色积液，采集肺组织并做药敏试验，现报告如下：

一、材料与方法

1.样品采集。采集疑似感染肺炎支原体的山羊肺组织各1份，冷冻保存，低温运输。

2.主要培养基。15%马血清改良Hayfliek氏培养基，琼脂0.7%的血清琼脂培养基。

3.主要试剂。主要各药敏片购自杭州天和微生物试剂有限公司。

4.PCR检测。

（1）PCR引物设计与合成。参照已发表的羊肺炎支原体和丝状支原体保守序列设计引物并合成。

（2）肺组织中病原DNA的提取。采用Trizol法提取细菌总DNA。

（3）PCR扩增。采用25μl反应体系。

（4）电流观察结果。反应结束后，取5μlPCR产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，并在凝胶成像系统上观察、拍照。结果如图1。……