温斯健 倪娜娜 周晓伟 吴琼 王小坡 宋昊 张韡 孙建方

210042南京，中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所病理科（温斯健、吴琼、王小坡、宋昊、张韡、孙建方），江苏省皮肤病性病分子生物学重点实验室（倪娜娜、周晓伟）

过表达RhoD对人黑素瘤A375细胞骨架和迁移侵袭的影响

温斯健 倪娜娜 周晓伟 吴琼 王小坡 宋昊 张韡 孙建方

210042南京，中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所病理科（温斯健、吴琼、王小坡、宋昊、张韡、孙建方），江苏省皮肤病性病分子生物学重点实验室（倪娜娜、周晓伟）

目的探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375⁃RhoD组和A375⁃增强型绿色荧光蛋白（EGFP）组，分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞仪检测细胞周期，Western印迹法检测丝切蛋白、磷酸化丝切蛋白、Diaph2和RhoD的表达。结果与A375⁃EGFP组细胞相比，A375⁃RhoD组细胞体积增大，应力纤维变细，软弱无力，黏着斑增多；丝状伪足形成增加；皱褶缘和板状伪足无明显变化。Transwell迁移实验显示，A375⁃EGFP组和A375⁃RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为152.67±11.23和72.67±5.03，两组间差异有统计学意义（t=11.25，P＜0.05）。Transwell人工基底膜侵袭试验显示，A375⁃EGFP组和A375⁃RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为78.33±12.34和9.00±1，两组间差异有统计学意义（t=9.70，P＜ 0.05）。A375⁃EGFP和A375⁃RhoD两组间G1期、S期和G2期细胞所占百分比差异均无统计学意义（P＞0.05）。Western印迹结果显示，A375⁃RhoD组细胞可在RhoD的刺激下激活下游信号效应分子Diaph2，促进其表达，而A375⁃EGFP组未能激活，两组间丝切蛋白和磷酸化丝切蛋白表达差异不显著。……