程　林　王子乔　徐六妹　唐　娴　周　泱　王　辉

(深圳市第三人民医院，深圳518112)



酵母表面展示多肽片段分析Δ42PD1的免疫原性①

程林王子乔徐六妹唐娴周泱王辉

(深圳市第三人民医院，深圳518112)

目的：分析Δ42PD1胞外区的免疫原性。方法：将Δ42PD1胞外区编码基因分为6个片段，分别用PCR的方法进行扩增，并克隆至酵母表面展示质粒pCTCON2。分别将重组酵母表达质粒转化酵母细胞，涂布SDCAA平板，挑取单细胞克隆于SGCAA培养基中诱导目的基因的表达。通过肌肉注射Δ42PD1真核表达质粒加局部电穿孔的方法免疫BALB/c小鼠，制备鼠抗人Δ42PD1免疫血清。用流式细胞术的方法分析免疫血清与酵母表面展示的Δ42PD1多肽片段的结合。结果：PCR扩增的Δ42PD1的6个片段的编码序列全长均110 bp,核酸序列分析显示克隆的目的基因与GenBank中已经登记的PD1基因序列100%同源；流式细胞术的结果发现酵母表面展示的Δ42PD1的F3和F2片段可与Δ42PD1的免疫血清发生明显结合。结论：Δ42PD1的F3和F2片段是该分子的免疫优势区域，为制备Δ42PD1的单克隆抗体及表位筛选奠定了基础。

程序性细胞死亡受体1；Delta-42程序性细胞死亡受体1；酵母表面展示；免疫原性；流式细胞术

程序性细胞死亡受体1(Programmed cell death 1，PD1)，又名CD279，属CD28家族，为Ⅰ型跨膜蛋白，由胞外区、跨膜区和胞内区组成。其胞外区含有1个免疫球蛋白可变区样结构，胞内区含有2个酪氨酸，分别组成免疫受体酪氨酸抑制模体和免疫受体酪氨酸转换模体[1]。PD1诱导表达于活化的T细胞、B细胞、自然杀伤细胞以及单核细胞。与其配体PD-L1或PD-L2的相互作用后，PD1通过磷酸化酪氨酸模体继而向细胞内传递抑制性信号，抑制免疫细胞的活化和细胞因子的分泌，最终调节机体免疫活化和免疫耐受[2，3]。……