梁志林，刘志刚，邬玉兰，陈思敏，杨平常，刘晓宇



粉尘螨13.8 kDa溶菌酶的克隆表达、纯化鉴定及生物信息学分析

梁志林，刘志刚，邬玉兰，陈思敏，杨平常，刘晓宇

目的克隆表达粉尘螨13.8 kDa 溶菌酶(Bac)基因, 纯化鉴定蛋白的过敏原性, 并进行生物信息学分析。方法

粉尘螨；13.8 kDa 溶菌酶(Bac)；原核表达；免疫原性鉴定；生物信息学分析

在已知的数十种尘螨中,与人类过敏性疾病关系最密切的主要有屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus, Der p)和粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae, Der f)，可诱发I型变态反应, 从而引起哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎和荨麻疹等多种过敏性疾病[1-2],是最重要的过敏原[3]。目前, 利用尘螨的主要过敏原来检测尘螨过敏和进行免疫治疗是非常重要的手段。我国学者首次对粉尘螨基因组学和转录组学进行研究，并对Der f1-24进行报道[4-5]，极大地丰富了尘螨过敏原基础研究。本文利用基因工程技术克隆粉尘螨Bac基因，并利用pET-44a原核表达系统进行表达及分析，获得具有IgE结合活性的重组过敏原13.8 kDa 溶菌酶(Bac)，并对免疫学特性进行鉴定；同时，用生物信息学方法对其结构和功能进行分析，为进一步研究粉尘螨Bac过敏原的结构和功能提供理论依据。

1　材料和方法

1.1主要试剂和材料

1.1.1菌株和动物粉尘螨(Der f)由深圳大学过敏反应与免疫学研究所标准化纯培养并提供，大肠杆菌E.coliTop10F’和E.coliBL21 (DE3) 为本实验室保存。

1.1.2质粒和试剂原核表达载体p ET-44a为本研究室保存。限制性内切酶EcoR I和XhoI、T4 连接酶、AMV 反转录酶、Taq DNA 聚合酶等购自Ta KaRa 公司。高保真Pfu DNA 聚合酶购自Fermentas公司。RNA提取试剂盒、DNA 片段纯化试剂盒购自Qiagen 公司。……