张鹤 姜彬 冯志彪 屈玉霄 李璇

摘要：建立了基于聚（乙二醇ran丙二醇）单丁基醚（聚合物）与磷酸盐、氯化钠的双水相体系对乳清分离蛋白（WPI）中的α乳白蛋白（αLA）和β乳球蛋白（βLG）进行分离，并对其分离条件进行了优化。系統地研究了双水相体系pH值、聚合物与KH2PO4溶液体积比、NaCl添加量和WPI浓度对αLA和βLG的分离效果的影响， 采用液相色谱法对αLA和βLG的分离效果进行评价。结果表明，聚合物/KH2PO4双水相体系pH=4.0， 40%（m/m）聚合物与15.5%（m/m）KH2PO4的体积比为4 mL∶4 mL，NaCl添加量为0.40 g/10 mL， WPI浓度为1 mg/mL时，αLA和βLG分离效果最好，上相中αLA的萃取率为98.2%，下相中βLG的萃取率为96.6%。

关键词 ：双水相； 乳清分离蛋白； 聚（乙二醇ran丙二醇）单丁基醚； 分离

1 引 言

乳清分离蛋白（WPI）是蛋白质混合物，在乳清分离蛋白中，α乳白蛋白（αLA）和β乳球蛋白（βLG）的含量占总WPI含量的80%以上[1]，并被广泛应用于食品、医药、精细化工等领域，因此具有很高的商业价值[2，3]。现已发现αLA具有多种生理功能，人αLA可以被转化成一种可以诱导肿瘤细胞凋亡的蛋白质，牛αLA也可以被转化成这种对肿瘤细胞有相似活性的物质。在αLA中发现有血管紧张素转移酶（ACE）抑制活性，含有ACE抑制肽的水解产物已经用于高血压患者的血压控制。βLG具有优异的热与冷凝胶特性以及良好的氨基酸谱。然而，儿童对βLG有过敏效应，因此在水解或脱除这种蛋白质后再应用于婴儿或低敏人群[4]。

近年来，双水相体系（ATPS）常应用于分离乳蛋白中各种单体蛋白质。2011年，Jara等[5]采用乳清分离蛋白浓缩物（WPC）/羟丙基甲基纤维素作为双水相体系， 分离WPC中的αLA和βLG，结果表明，分子量低的蛋白质αLA和βLG均被保留在上相，分配比例高达90%，但两种蛋白未能分开。……