马志恒　蒋海存　陈建新　郝　鑫　李　萍　贾超丽　董　冬　张　刚



·临床研究·

mTOR信号通路与胃癌的相关性研究

马志恒蒋海存陈建新郝鑫李萍贾超丽董冬张刚

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的一种，其自酵母中分离出来，在P13K/AKT/mTOR信号通路中是蛋白激酶B(Akt)的下游底物。mTOR是一种含有2 549个氨基酸残基的蛋白质分子，生理状态下，该蛋白在各种刺激因子的作用下发挥调控细胞周期、细胞生长增殖等作用，因此mTOR在多种肿瘤组织中表达异常受到关注，也是肿瘤治疗的靶点之一。p-mTOR是磷酸化的mTOR，是mTOR的活化形式。本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western-blot)技术来检测胃癌及正常胃黏膜组织中p-mTOR mRNA及蛋白的表达情况，为胃癌的临床诊断和治疗提供帮助。

1　材料和方法

1.1材料

收集河北大学附属医院2011年1月至2015年1月期间手术切除的新鲜胃癌标本50例，癌旁正常胃黏膜组织50例(距肿瘤边缘>5 cm)，术前均未行放射治疗及化学治疗，术后病理学检查均为胃腺癌。50例胃癌标本中，男31例，女19例；年龄42～82岁，平均年龄(53±4.51)岁，年龄≤50岁27例，年龄>50岁23例；高分化10例，中低分化40例；有淋巴结转移35例，无淋巴结转移15例；浸润胃全层37例，未累及胃全层13例。新鲜标本-80℃低温冰箱保存备用。

1.2主要试剂

兔抗人p-mTOR单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，PCR引物合成于大连Takara公司，RT-PCR试剂盒购自Takara公司。β-actin一抗为鼠抗人单克隆抗体，购自美国Invitrogen公司。

1.3RT-PCR方法检测p-mTOR mRNA的表达

液氮中取出少量胃组织标本，用眼科剪剪碎，用TRIzol、氯仿和异丙醇提取总RNA，分析其完整性、纯度和浓度。逆转……