曹芳芳　李娟　刘海峰

摘要：应用RT-PCR和 SMART RACE等技术克隆山葡萄二氢黄酮醇4-还原酶基因的全长cDNA序列，结果表明，该基因全长1 362 bp，包括1 014 bp的完整开放阅读框，推测其编码337个氨基酸。该基因表达产物相对分子质量为37.50 ku，等电点为5.95，是稳定蛋白，不包含信号肽。蛋白质疏水性分析结果表明，DFR疏水性最大值为2.511，最小值为-2.267，平均值为-0.146，整体表现为亲水性。二级结构分析结果表明，DFR的二级结构主要以α-螺旋（35.31%）和不规则卷曲（46.29%）为蛋白最大量的结构元件。对不同植物DFR氨基酸序列进行多重比对发现，同源性较高，DFR与NADPH结合区域和底物结合区域都表现出高度保守。用推导的氨基酸序列与蛋白质数据库进行同源性比较，其氨基酸序列与欧亚种葡萄、大豆、矮牵牛等植物的DFR氨基酸序列两两比对的相似性系数分别为98%、76%、74%。

关键词：山葡萄；二氢黄酮醇4-还原酶；克隆；序列分析

中图分类号： S663.101 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0034-05

山葡萄（Vitis amurensis）为葡萄科葡萄属多年生藤本植物，植株似葡萄而细小。山葡萄是葡萄属中最抗寒的一个种，是葡萄属植物抗性育种的珍贵资源，已被多个国家和地区所重视。山葡萄是一种经济价值很高的野生经济植物，成熟后的果实味甜酸，富含果汁，可生食，用山葡萄浆果酿造的葡萄酒品质优良，是我国东北地区葡萄酒工业的主要原料。葡萄酒具有预防心脑血管疾病的作用，原花青素[1]是其中最主要的作用成分。研究表明，原花青素存在较强的抗氧化活性和抗癌活性，对降低毛细血管的渗透性有重要的药理作用。……