禄亚洲　尹秀　左晓宇

摘要：以棉花纤维组织为材料，根据NCBI棉花EST进行同源搜索、比对和序列拼接，经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因（GhGGPase2）的cDNA开放阅读框为1 335 bp，为包含445个氨基酸的蛋白质，分子质量约为49 ku。利用软件进行蛋白质序列分析，GhGGPase2蛋白具有组氨酸三聚体（HIT）蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的结果表明棉花GhGGPase2与猕猴桃AdGGPase在进化上亲缘关系上较近。构建原核表达载体pET28a-GhGGPase2并转化大肠杆菌，将重组载体pET28a-GhGGPase2导入大肠杆菌BL21（DE3）中通过IPTG诱导表达后经过SDS-PAGE分析，显示成功获得分子质量为49 ku左右的诱导表达蛋白GhGGPase2。将GhGGPase2基因构建到植物真核表达载体pCAMBIA2300中，利用农杆菌通过叶盘法转化烟草，经PCR分子鉴定，获得了含GhGGPase2转基因烟草植株。研究结果将为进一步阐明该基因的生物学功能奠定基础。

关键词：棉花纤维；L-半乳糖磷酸化酶基因；原核表达；克隆；遗传转化

中图分类号： S562.032 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0026-05

棉花是全球重要的经济作物，也是我国重要的农产品及纺织原料，是国民经济的支柱产业之一，具有极其重要的战略地位[1]。棉花纤维品质中最重要的参考指标是纤维的强度和长度，而细胞的伸长或膨大发育与纤维的最终品质密切相关[2]。抗坏血酸是广泛存在于植物组织中的一种抗氧化小分子物质，尤其是在细胞分裂旺盛的植物组织中含量较高，不仅对植物生长发育、防卫、分化等许多生理过程起重要作用，还与细胞伸长密切相关[3-5]。棉花纤维细胞的结构是长而不分支的单细胞，是研究细胞生长发育与分化的理想材料。……