姚雪，李辉，张凯鑫，周怀谷，罗亚平△

(1.中国人民公安大学刑事科学技术学院，北京 100038；2.上海市刑事科学技术研究院，上海 200083)

1 引 言

人类皮肤微生物组指所有在人类皮肤上的微小生物，如细菌、真菌和病毒等[1]。针对细菌的分析主要是基于16S rRNA基因的测序结果，而这种分析方法存在一定的劣势。首先，该基因并非单拷贝基因，因此，其测序结果总体上来说仅仅是半定量的[2]，会影响微生物群落的α多样性及β多样性的测度时，导致分析结果与实际情况间存在偏差；其次，16S rRNA基因的可变区变异程度不够大，在区分同一属内不同种时存在困难。已有的研究显示，与宏基因组shotgun测序相比，实验16S rRNA基因的V1-V3区测序获得的微生物群落结构分析结果与之相似，而V4区测序获得的微生物群落结构分析结果却不尽人意[3]。为了弥补16S rRNA基因存在的这些问题，开发新的管家基因引物是必需的。

在综合分析人类皮肤微生物群落组成的文献[4-6]的基础上，选择了4个最为普遍存在的属的细菌，从NCBI的Genome数据库中下载了这四个属60种细菌的全基因组并对其进行了分析，具体包括：Corynebacterium属24种细菌，Lactobacillus属12种细菌，Staphylococcus属8种细菌，Streptococcus属16种细菌。在对这些属的基因组分析的基础上，筛选出一些普遍存在的单拷贝功能基因[7]，并针对其保守区域设计了一些具有通用扩增能力的引物。将这些引物成功地应用在分析不同年龄阶段、不同性别的36名志愿者的皮肤微生物群落结构特征分析上。结果证明这些新设计的引物对的扩增产物测序结果经分析，能够成功将细菌鉴定到种，在分析皮肤微生物群落方向具有良好的应用前景。……