扬子江药业集团北京海燕药业有限公司（102206）薛丽芳

消旋卡多曲片由消旋卡多曲、乳糖、羧甲淀粉钠、硬脂酸镁、羟丙甲纤维素、阿司帕坦、70%乙醇组成。其中消旋卡多曲为主要成分，具有治疗急性腹泻的功效。

鉴于药典中并无消旋卡多曲片的检验方法，本文建立了一种高效液相色谱法测定片剂中消旋卡多曲的含量，保证该片剂的临床疗效。此方法操作简单，定量准确，线性范围宽，溶液稳定性良好，片剂中的辅料不干扰测定。

1 仪器与试剂、试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司，Agilent1260），电子分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，XS205型]，pH计[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，SevenEasy型]。

1.2 试剂、试药 醋酸、醋酸铵（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），甲醇、乙腈[色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司]，水为超纯水。

消旋卡多曲对照品（中国食品药品检定研究院，批号100682-201502，含量99.9%），消旋卡多曲片（扬子江药业集团北京海燕药业有限公司，规格30mg，批号15010601、15010602、15010701）。

2 方法与结果[1][2]

2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈-0.02mol/L醋酸铵溶液（用醋酸调节pH值至5.0）（65∶35）为流动相；检测波长210nm；柱温30℃；流速1.0mL/min；进样体积20μL。

附图 专属性图谱。A：阴性空白溶液 B：空白溶液 C：供试品溶液 D：对照品溶液

2.2 对照品溶液的配制 精密称取消旋卡多曲对照品约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的配制 取莫尼卡（消旋卡多曲片）20片，精密称定，研细，精密称取适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含消旋卡多曲0.1mg的溶液，作为供试品溶液。

2.4 阴性模拟制剂的制备 按照消旋卡多曲片的处方工艺组成，制备不含消旋卡多曲的阴性模拟制剂。

2.5 系统适用性试验 在高效液相色谱法中理论塔板数是衡量色谱柱效能的参数之一，用于定量表示色谱柱的分离效率，其数值越大色谱柱的柱效越高。本次实验以消旋卡多曲的理论塔板数为指标，考察了色谱柱的效能。具体方法为精密量取对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测得消旋卡多曲的理论塔板数为8656。

2.6 方法学考察

2.6.1 专属性试验 取阴性模拟制剂按照供试品溶液配制方法配制阴性空白溶液，取阴性空白溶液、空白溶液（流动相）、对照品溶液、供试品溶液各20μL，在2.1色谱条件下分别进样，记录色谱图，对比阴性空白试验图谱、空白试验图谱、对照品图谱、供试品图谱，确定流动相与辅料是否影响消旋卡多曲的出峰。

对照品溶液和供试品溶液均在保留时间3.4min处出峰，而阴性空白溶液和空白溶液在相近的保留时间处均未出现干扰峰。由配制过程可知对照品溶液和供试品溶液中均含有消旋卡多曲，阴性空白溶液和空白溶液中均不含消旋卡多曲，因此可判定3.4min处的峰为消旋卡多曲峰。详见附图。

2.6.2 检测限、定量限[3][4]取对照品溶液在2.1色谱条件下进样20μL，记录色谱图，对照品溶液中消旋卡多曲峰的信噪比为15000，远大于10。

取消旋卡多曲对照品溶液稀释至消旋卡多曲峰高与基线噪音高度比约为10∶1确定定量限，之后再连续测定5针，记录该色谱图，计算其浓度。结果为10.97ng/ml，主峰保留时间的RSD=0.1%，峰面积的RSD=4.3%。

取消旋卡多曲对照品溶液稀释至消旋卡多曲峰高与基线噪音高度比约为3∶1确定检测限，之后再连续测定2针，记录该色谱图，计算其浓度。结果为4.316ng/ml，主峰保留时间的RSD=0.1%，峰面积的RSD=9.6%。

2.6.3 仪器精密度试验 取对照品溶液连续进样6次，记录色谱图，峰面积分别为5244.28027、5250.30664、5252.06592、5250.54102、5250.51221、5257.78760，峰面积的相对标准偏差为0.1%。

2.6.4 重复性试验 取莫尼卡（消旋卡多曲片）样品，制备6份供试品溶液，按2.1中色谱条件进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果为95.3%、96.8%、96.3%、95.4%、96.6%、96.7%，RSD=0.7%，重复性良好。

2.6.5 中间精密度试验[5][6]取三批莫尼卡（消旋卡多曲片）样品，在相近的时间由不同的实验员采用不同的仪器进行含量测定，对比测定的数据。实验员A的含量测定结果分别为96.0%、96.5%、95.2%，实验员B的含量测定结果分别为96.8%、95.8%、95.7%，两者的结果相差不大表明此方法的中间精密度良好。

2.6.6 加标回收试验[7][8]称取阴性模拟制剂[9]约25mg共9份，分别置100ml量瓶中，于1～3号中分别加入消旋卡多曲对照品8mg，4～6号中分别加入消旋卡多曲对照品10mg，7～9号中分别加入消旋卡多曲对照品12mg，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为80%、100%、120%的回收率溶液。取空白溶液、对照品溶液、回收率溶液按2.1中色谱条件测定，计算回收率，结果如附表所示。

附表 回收率结果

2.6.7 线性关系考察 精密称取消旋卡多曲对照品约20mg置100mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL于10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得线性系列溶液。按2.1色谱条件分别进样，测定峰面积，以对照品溶液浓度X（mg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得出回归方程Y=49820X+150.62，相关系数r=0.99937，线性范围为0.02158mg/mL～0.2003mg/mL。

2.6.8 溶液稳定性考察 取对照品溶液和供试品溶液，在室温条件下放置0h、3h、6h、12h、18h、24h、36h后分别进样20μL，记录色谱图，考察两份溶液在36小时之内的峰面积变化。计算得对照品溶液各时间点峰面积的RSD为0.5%，供试品溶液各时间点峰面积的RSD为0.4%。表明溶液在36小时内稳定。

2.7 样品含量测定 按2.2项下的方法制备对照品溶液，按2.3项下的方法制备3批供试品溶液，照2.1的色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算样品的含量。测得结果为3批样品中消旋卡多曲含量分别为标示量的96.0%、96.5%、95.2%，平均含量为95.9%。

3 结论与讨论

综上所述，本方法的系统适用性符合要求，专属性高，定量准确，精密度良好，线性范围宽，溶液在36小时内稳定，适合于消旋卡多曲的含量测定[12-15]。本文中系统适用性试验仅考察了色谱柱的柱效，在后续试验中有已知杂质后可以考察消旋卡多曲与已知杂质的分离度是否符合要求，以增强系统的适用性。

在检测限与定量限的考察中，定量限浓度确定后连续进样六次，而检测限只进样了三次，后续亦可以进样六次或以上考察检测限的准确性与精密度[16][17]。

在专属性考察中，后续可以考虑用破坏的方法进行专属性试验，即用酸、碱、高温等条件破坏消旋卡多曲后再进样[10][11]。

本次试验中未考察该方法的耐用性，后续可以增加方法的耐用性试验。可通过改变流速、改变柱温等改变色谱条件的一些参数以及在不同实验室间进行试验来考察方法是否耐用[18][19]。