李明霞潘和平阎萍吴晓云王英杰

（1.西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730070；2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州 730050；3.甘肃省牦牛繁育工程重点实验室，兰州 730050）

牦牛GDF9和BMP15基因的克隆、表达分析及miRNA研究

李明霞1，2，3潘和平1阎萍2，3吴晓云2，3王英杰1，2，3

（1.西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730070；2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州 730050；3.甘肃省牦牛繁育工程重点实验室，兰州 730050）

以牦牛GDF9和BMP15基因为研究对象，采用PCR方法分别克隆出GDF9和BMP15的两个外显子片段，RT-PCR方法分析了GDF9和BMP15及靶定miRNA在各组织中的表达情况。实验结果显示，克隆扩增获得外显子区进行生物信息学分析。牦牛GDF9基因外显子片段长分别411 bp和1 082 bp，编码453个氨基酸；BMP15基因外显子片段长分别为323 bp和802 bp，编码372个氨基酸。GDF9编码蛋白是亲水蛋白，含有一个信号肽和15个潜在磷酸化位点；BMP15编码蛋白是亲水蛋白，不含信号肽，有6个潜在磷酸化位点。通过实时荧光定量PCR方法分析牦牛GDF9和BMP15基因在不同组织中的表达量，结果表明GDF9在卵巢和子宫中表达相对较高，且卵巢表达显著高于其他组织，心、肾、胰和脾中无表达。BMP15仅在卵巢中表达。TargetScan预测靶定牦牛GDF9和BMP15基因的靶定miRNA，分析GDF9靶基因bta-miR-193a-3p和bta-miR-193b在心、脾、肺、肾和子宫中的表达量，结果显示bta-miR-193a-3p脾中表达量显著高于其他组织，但在心、肺和子宫中均不表达。bta-miR-193b在心和肾中没检测到表达，在肺中的表达量显著低于脾和子宫中。

牦牛；GDF9；BMP15；miRNA

生长转化因子9（Growth differentiation factor 9，GDF9）和骨形态发生蛋白15（Bone morphogenetic protein 15，BMP15）都作为转化生长因子（TGF-β）超家族的成员，参与早期卵泡的生长和分化。……