TALEN介导的CXCR4敲除肝癌细胞株的建立

2016-10-13张文美丁妍郭兴荣李东升赵万红王小莉

生物技术通报 2016年2期

关键词：肝癌研究

张文美丁妍郭兴荣李东升赵万红王小莉

（1.湖北医药学院附属太和医院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室，十堰 442000；2. 湖北医药学院生物医学工程学院，十堰 442000）

TALEN介导的CXCR4敲除肝癌细胞株的建立

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（1.湖北医药学院附属太和医院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室，十堰 442000；2. 湖北医药学院生物医学工程学院，十堰 442000）

通过TALEN打靶建立CXCR4的细胞株，旨在研究CXCR4对肝癌的影响。选用肝癌细胞株HepG2，采用转录激活样效应物核酸酶（TALEN）干扰细胞中CXCR4的表达。构建的CXCR4 TALEN质粒转入HepG2细胞，通过T7E1酶切确定打靶效率为40%，并通过测序筛选出了CXCR4敲除的单克隆细胞，免疫荧光和Western blot进一步证实CXCR4基因表达显著下调。

TALEN；CXCR4；肝癌；基因打靶

趋化因子受体4（Chemokine receptor 4，CXCR4）属于高度保守的7次跨膜G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor，GPCR），主要参与信号转导［1］。趋化因子可影响肿瘤的生长、诱导血管生成、使肿瘤逃避免疫系统的监视，从而在肿瘤的发生发展中发挥重要作用［2］。研究表明，CXCR4与肝癌细胞生长、迁移和侵袭密切相关［3］。转录激活样效应物核酸酶（TALEN）可对细胞的基因组进行改造影响蛋白的表达，目前运用此技术介导的靶位点的基因敲除已经成为一种新型基因打靶工具［4］。此技术操作简单、对细胞使用要求不高，适用于大多数物种及各种体外培养细胞的基因改造［5］。本研究将应用TALEN 技术建立CXCR4基因敲除的HepG2细胞系，以期研究CXCR4对肝癌的影响。