张加一，刘 霞，胡芳芳，程永安

（西北农林科技大学园艺学院 陕西杨凌 712100）

随着植物基因工程技术的迅速发展，运用生物技术进行种质创新、改良南瓜品种已经成为南瓜遗传育种研究的新途径。建立高效的南瓜再生体系是南瓜功能基因鉴定、转基因等研究的基本条件之一。目前关于子叶节再生体系的研究主要集中在大豆[1-3]、黄瓜[4-6]、甜瓜[7-9]、西瓜[10-12]等作物上，有关南瓜子叶节离体培养的研究已有报道[13-14]，但再生体系并未完善，诱导出芽率不稳定，生长缓慢。笔者对南瓜子叶节再生体系进行了优化，以6种南瓜的子叶为试验材料，进行诱导再生。目的是建立一套高效的南瓜子叶节再生体系，为进一步开展南瓜遗传转化和生物育种技术工作奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试南瓜品种为‘上桔’‘金栗’‘银栗’‘贝栗灰’‘永安2号’‘永安5号’，均由西北农林科技大学园艺学院南瓜课题组提供。以MS培养基为基本培养基，附加 30 g·L-1蔗糖，8 g·L-1琼脂条，pH 值为5.8。1/2 MS培养基为MS培养基中大量元素减半，其他元素不变，pH值为5.8。其他激素如KT、6-BA、IBA，均配成母液于4℃冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 外植体的获得 将浸泡1 h的种子在超净工作台上去壳，在70%酒精消毒30 s，再用0.1%HgCl2消毒10 min，无菌水冲洗4次。将种子接种于1/2 MS培养基上，在25℃培养箱中暗培养3 d。在超净工作台上将外种皮剥去，再置于光照强度2 500 lx、光照16 h/d的条件下培养。

1.2.2 不定芽分化的诱导 选取日龄8～10 d、苗态为2片叶子斜向上伸展的无菌幼苗，用解剖刀切去部分下胚轴，留取3～5 mm连着2片子叶的下胚轴，将2片子叶分开，剔除中间的顶芽生长点，将子叶和3～5 mm下胚轴部位用无菌手术刀横向划多道伤口，然后将有伤口的一端垂直插入添加了不同浓度激素的培养基中。……