韩一芳　钟璟皓　张晨　张琪　吕恒　胡丹　张锦海　王长军

210002 南京军区军事医学研究所 疾病预防控制所



·论著·

克里米亚-刚果出血热病毒可视化逆转录环介导等温扩增快速检测法的建立

韩一芳钟璟皓张晨张琪吕恒胡丹张锦海王长军

210002 南京军区军事医学研究所 疾病预防控制所

目的建立克里米亚刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus，CCHFV)的可视化逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)快速检测法。方法体外合成CCHFV的S基因，构建重组质粒，体外转录为模板RNA，在线设计3组LAMP引物，使用实时浊度仪筛选出最佳引物，以羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue，HNB)作为指示剂，建立可视化RT-LAMP反应体系。结果实时浊度检测结果显示合成的3组LAMP引物中第1组引物的扩增效率最高， 峰值出现于20 min。添加环引物后，扩增效率进一步提高，13 min即可达到峰值。利用最佳引物建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法最低检测限浓度为10拷贝/μl，检出时间为30 min，较巢式RT-PCR法和实时定量RT-PCR法分别高1-3个数量级。该方法稳定性好，不会与症状相近的病原体如肾综合征出血热汉坦病毒(汉滩型和汉城型)、马尔堡病毒、新型布尼亚病毒、埃博拉病毒(GP蛋白和VP蛋白)产生交叉反应。结论建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法，灵敏度好、特异度高、快速廉价、操作简单，无需开盖即可直接观察结果，适用于条件有限的基层单位和偏远地区。但仍需临床样本进行进一步验证。

【主题词】克里米亚-刚果出血热；逆转录环介导等温扩增；可视化检测

Fund programs: National Special Project of Prevention and Treatment of Major Communicable Diseases(2013ZX10004103，2013ZX1004218); Jiangsu Provincial Supporting Technology (social development) Project(BE2013603)；Military Key Project(BWS14J025)

克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorr-hagic fever, CCHF)由克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)引起，1944年在克里米亚地区首次出现，随后在刚果暴发而得名[1]。……