白宗利，乐智勇，卢翠敏，万薇，陈华师，董婧婧，许冬瑾

(1.康美(北京)药物研究院有限公司，北京 102629；2.康美药业股份有限公司，广东 普宁 515300；3.广东康美药物研究院有限公司，广东 广州 510000)

不同粉碎度三七粒度分布和皂苷类成分溶出曲线研究△

白宗利1*，乐智勇1，2，卢翠敏1，万薇1，陈华师3，董婧婧3，许冬瑾2

(1.康美(北京)药物研究院有限公司，北京 102629；2.康美药业股份有限公司，广东 普宁 515300；3.广东康美药物研究院有限公司，广东 广州 510000)

目的：比较市售三七破壁饮片、三七细粉与自制三七超微粉、三七细粉颗粒的粒度分布和溶出曲线。方法：对三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒进行粒度分布测定，采用HPLC法，以三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总含量为指标，测定并绘制溶出曲线。结果：三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒样品粒度分布d(0.9)分别为51.543、124.142、27.760、107.539 μm，在15 min四者的累积溶出量均达到85%以上。结论：三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1总含量的溶出曲线相似。

三七；中药破壁饮片；细粉；粒度分布；溶出曲线

三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎，具有散瘀止血、消肿定痛的功能[1]。杨连威等[2]报道，中药超微粉碎后可提高药物中有效组分的溶出率，增大药物的生物利用度，有利于保存生物活性成分，节省药材，降低药物用量等[3]。本试验对某市售三七破壁饮片、三七细粉及自制三七超微粉、三七细粉颗粒的粒度分布进行研究，同时采用HPLC法测定溶出液主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总含量，绘制溶出曲线，考察三七破壁饮片3种皂苷总含量90 min内的溶出行为，及其与三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒的溶出曲线差异。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪；AL204型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；RC806型溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；MS2000型激光粒度仪(马尔文)；WZJ-12A型振动式药物超微粉碎机(济南倍力粉技术工程有限公司)。

1.2 试药

某市售三七破壁饮片(批号：20140401)；某市售三七细粉(批号：140750491)；三七药材(康美药业股份有限公司，批号：20140627)；人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为110703-201128，110704-201223，110745-200516)；无水乙醇为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]；纯化水为自制。

2 方法与结果

2.1 样品制备

2.1.1 三七超微粉的制备 取三七药材，打碎，先用万能粉碎机粉碎，过80目，再将80目粉末用振动式药物超微粉碎机在振幅5.5 mm、工作温度-15 ℃条件下粉碎30 min，即得三七超微粉。

2.1.2 三七细粉颗粒 取某市售三七细粉500 g，加80%的乙醇，24目制粒，70 ℃干燥，即得。

2.2 粒度分布

参照《中华人民共和国药典》2015版四部通则0982第三法粒度和粒度分布测定法(湿法测定)[4]，以市售三七细粉为样品，考察湿法测定中的分散介质、超声时间、遮光度3个因素[5]，并测定市售三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒样品的粒度分布。

2.2.1 分散介质的选择 取市售三七细粉适量，分别以水、20%乙醇、35%乙醇、50%乙醇、无水乙醇为分散介质，超声3 min，测定样品粒度分布，结果见表1。由结果可知，用35%乙醇作为分散介质即可达到良好的分散效果。

2.2.2 超声时间的选择 取市售三七细粉适量，以35%乙醇为分散介质，分别超声1、3、5 min，测定样品粒度分布，结果见表2。由结果可知，选择超声时间3 min，既能保证样品良好的分散性，又能降低溶胀现象。

表1 不同分散介质三七细粉粒度分布测定结果

表2 不同超声时间三七细粉粒度测定结果

2.2.3 遮光度考察 取市售三七细粉适量，以35%乙醇为分散介质，超声3 min，分别在3个不同遮光度下测定样品的粒度分布，结果见表3。由结果可知，不同遮光度对检测结果影响不大，应控制遮光度在10%～20%。

表3 不同遮光度三七细粉粒度分布测定结果

2.2.4 重复性 分别取适量的市售三七细粉3份，以35%乙醇为分散介质，超声3 min，在遮光度10%～20%测定样品的粒度分布，结果见表4。由结果可知，该方法重复性良好。

表4 三七细粉粒度分布重复性测定结果

2.2.5 样品粒度分布测定 分别取三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒样品适量，按2.2.4项下条件进行测定，结果见表5。结果表明，4种三七粉样品粒度分布d(0.9)排序：三七超微粉<三七破壁饮片<三七细粉颗粒<三七细粉。

表5 市售三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒粒度分布测定结果 /μm

2.3 溶出曲线

以三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总含量为考察指标，依照《中华人民共和国药典》2015版四部附录0931第二法溶出度与释放度测定法(桨法)[4]对三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉及三七细粉颗粒的溶出曲线进行测定并比较。

2.3.1 色谱条件 色谱柱为ZDRBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈作为流动相A，水为流动相B，进行梯度洗脱，程序详见表6；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；检测波长：203 nm[1]。

表6 梯度洗脱程序表

2.3.2 对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Rg110.28 mg、人参皂苷Rb110.32 mg、三七皂苷R12.63 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液制备 精密称取不同粉碎程度的三七样品约1 g，每个样品平行取6份，按《中华人民共和国药典》2015版规定，采用桨法进行溶出试验，以纯化水500 mL为溶出介质，转速为50 r·min-1，温度为(37±0.5)℃，分别于5、10、15、20、30、60、90 min取样5 mL，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。每次取样后及时补足等量减失的溶出介质。

2.3.4 溶出曲线测定 精密吸取100 μL供试品溶液，按2.3.1色谱条件进行测定，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总含量为指标，考察不同时间点的累积溶出量，绘制溶出曲线。结果见表7、图1。结果表明，4种样品的溶出速率排序：三七破壁饮片>三七细粉颗粒>三七超微粉>三七细粉。

表7 4种三七粉样品溶出曲线测定结果(n=6)

图1 三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒溶出曲线图

3 讨论

本试验对某市售三七破壁饮片、三七细粉、自制三七超微粉、三七细粉颗粒的粒度分布进行测定，并以纯水为溶出介质，对样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总含量溶出曲线进行考察。通过对比试验可以发现，三七超微粉的粒度分布d(0.9)最小，4种样品的溶出曲线相似，其中三七破壁饮片的溶出速率较快。

粒度和粒度分布测定法规定：湿法测定用于测定混悬供试品或不溶于分散介质的供试品；干法测定用于测定水溶性或无合适分散介质的固态供试品[4]。因此，测定三七粉粒度分布用干法、湿法均可，但三七破壁饮片、三七细粉颗粒是由三七粉制粒而得，需通过湿法超声使颗粒充分分散后测得粒度分布。为保持结果的一致性，选择湿法作为本试验粒度分布测定方法，并对测定条件进行初步考察。

在湿法测定前，已用干法测定三七细粉的粒度分布d(0.9)，为128.510 μm，作为湿法检测结果的对照。对分散介质考察时，发现以水为分散介质测得粒度分布结果较大，可能是三七粉在水中发生了团聚或吸水溶胀，影响测定结果；当乙醇浓度增大到35%以上时，粒度分布湿法测定结果与干法接近，因此，选择35%乙醇作为分散介质具有良好的分散性，粒子能在其中良好分散，控制团聚或溶胀现象，同时又降低检测成本。随着超声时间的延长，样品的遮光度略微增大，可能也是受样品吸水溶胀的影响。超声时间的选择应既能让样品在分散介质中充分分散，又要控制吸水溶胀对测试结果的影响。鉴于湿法测定存在溶胀问题，因而单独对三七粉体粒度进行测定时，建议用干法测定为宜。

三七类产品通常吞服或冲泡服用，因此，选择水为溶出介质对三七破壁饮片、三七细粉、三七超微粉、三七细粉颗粒的溶出行为进行比较。试验中三七破壁饮片、三七细粉颗粒溶出速度优于三七细粉、三七超微粉。说明三七细粉、三七超微粉作为粉体在溶出过程中因为比表面积大、表面能高出现团聚现象，不能被溶出介质快速润湿分散，阻碍了有效成分的溶出[6]，而制成颗粒的三七破壁饮片、三七细粉颗粒能够克服上述问题，获得良好的溶出效果。但在实际服用过程中，有效成分的吸收可能会受到胃酸、酶类及胃排空的影响。无论溶出的快慢，在时间足够的情况下，有效成分的利用率是否有显著差别，尚需通过相关研究来证实。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 杨连威，赵晓燕，李婷，等.中药超微粉碎后对其性能的影响研究[J].世界科学技术：中医药现代化，2008，10(6)：77-81.

[3] 罗刚，陈立庭，周晶.超微粉碎技术在中药研究中的应用[J].现代药物与临床，2011，26(2)：108-112.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[5] 陈勇军，梁学良，钱锦花，等.激光法检测中药破壁饮片粒度的影响因素探讨[J].今日药学，2014，24(2)：102-105.

[6] 吴小明，梁少瑜，程文胜，等.三七普通细粉与超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1体外溶出行为的比较研究[J].中草药，2013，44(24)：3489-3492.

StudyonDifferentParticleDiametersandDissolutionProfilesofPanaxnotoginseng

BAI Zongli1*，LEZhiyong1，2，LUCuimin1，WANWei1，CHENHuashi1，XUDongjin2

(1.BeijingKangmeiPharmaceuticalResearchInstituteCo.Ltd，Beijing102629，China;2.KangmeiPharmaceuticalCo.Ltd.，Puning515300，China;3.GuangdongKangmeiPharmaceuticalResearchInstituteCo.Ltd.，Guangzhou510000，China)

Objective：To compare the particle size distribution and dissolution curves of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles.Methods：The particle size distribution of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles was detected.HPLC method was used for determination of three saponins including ginsenoside Rg1and Rb1，notoginsenoside R1，the dissolution curves were drawn.Results：The particle size distribution d(0.9)of cell-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles were 51.543，124.142，27.760 and 107.539 μm，respectively.The dissolution rates exceeded 85% within 15 min.Conclusion：The dissolution curves of three saponins including ginsenoside Rg1and Rb1，notoginsenoside R1of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles were similar.

Panaxnotoginseng；cellwall-broken pieces of traditional Chinese medicine；common powder；particle size distribution；dissolution curves

2015-05-07)

广东省创新型企业院线提升计划项目(2013B07032007)

*

白宗利，中药制药工程师，研究方向：中药炮制饮片工艺及质量研究；E-mail：3050471@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.3.024