张莉娟， 何彬彬， 黄月红， 陈治新， 王小众



HB-EGF对HSC-T6细胞Ras/ERK通路的激活及对MMP-2、TIMP-1表达的影响

张莉娟， 何彬彬， 黄月红， 陈治新， 王小众

目的观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)激活肝星状细胞(HSC)过程中Ras/ERK信号通路的变化和对金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制物的影响。方法传代培养HSC-T6细胞，分空白对照组、HB-EGF处理组(20，40，80 ng/mL)，采用QRT-PCR法检测MMP-2、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达，并确定HB-EGF刺激HSC-T6 Ras/ERK通路(ERK1、ERK2、P38MAPK)活化的最佳浓度及最佳时间，检测该通路活化情况。结果QRT-PCR检测提示,MMP-2的表达随HB-EGF干预时间的延长增加，TIMP-1的表达随干预时间的延长递减；40 ng/mL HB-EGF培养HSC-T6 48 h后，EGFR mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05)；选择40 ng/mL HB-EGF培养48 h为最佳刺激时间与浓度，该处理组ERK1 mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05)，但ERK2、P38MAPK的变化无统计学意义；Western-blot检测提示该处理组ERK1蛋白的表达较空白对照组上调(P<0.05)。结论HB-EGF可影响HSC-T6的MMP-2、TIMP-1的表达；HB-EGF通过促进HSC-T6表达EGFR、ERK1，有效激活细胞内Ras/ERK信号通路。

表皮生长因子； 肝素； 肝细胞； 星形细胞； 大鼠； 细胞外信号调节MAP激酶类； RAS蛋白质类； 胞间信号肽类和蛋白质类； 基质金属蛋白酶类； 金属蛋白酶1组织抑制剂

肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)为间质来源的一种肝脏非实质细胞，它的活化与增殖是肝纤维化形成的中心环节，是分泌金属蛋白酶及其抑制物的主要细胞，参与调节肝脏的胶原代谢[1]。HSC活化后，多种细胞因子分别结合HSC上的特异性受体，激活胞内PI3-Akt、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)等信号转导通路[2]。已有研究发现，HSC内活化的ERK信号通路参与调控细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的合成及降解过程，包括促进Ⅰ、Ⅲ胶原合成，抑制金属基质蛋白酶-1(matrix metalloproteinase, MMP-1)、促进金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-1、2，TIMP-1、TIMP-2)的表达[3-4]。但HSC活化后，ERK通路调控MMP及其抑制物的具体机制还未完全阐明。

肝素结合性表皮生长因子样生长因子(heparin-binding EGF-like growth factor, HB-EGF)为表皮生长因子家族中的一员，具有高度肝素亲和力。……