韩 俊，邵淑娟，孙 兵.大连医科大学附属第一医院麻醉科，辽宁 大连，60；.大连医科大学组织学与胚胎学教研室，辽宁 大连，6044；.大连医科大学附属第一医院胸外科，辽宁 大连，60

Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多态性与肺癌易感性关系研究

韩 俊1，邵淑娟2，孙 兵3
1.大连医科大学附属第一医院麻醉科，辽宁 大连，116011；2.大连医科大学组织学与胚胎学教研室，辽宁 大连，116044；3.大连医科大学附属第一医院胸外科，辽宁 大连，116011

背景与目的：肺癌是全球肿瘤相关性死亡的主要病因之一。该研究旨在探索Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多态性与肺癌易感性关系。方法：2010—2015年，共收集400例具有明确病理诊断的肺癌病例，同时按照同性别，选取年龄±5岁进行匹配健康对照，采用TaqMan荧光探针法进行基因分型检测。对实验结果，采用SPSS 16.0软件进行统计分析。结果：共386例肺癌患者和394例健康对照者分型成功，与Fas基因的AA基因型携带者相比，GA和GG基因型携带者肺癌发病风险无显著性增加，OR值分别为1.05（0.77～1.44）和1.27（0.81～1.99），与Fasl基因的TT基因型携带者相比，CT和CC基因型携带者患肺癌的风险显著升高，调整年龄、性别和吸烟状态后，OR值分别为1.37（1.01～1.86）和1.74（1.09～2.77）。结论：Fasl-844 T＞C多态性可能与肺癌易感性有关，Fas-670 G＞A多态性可能与肺癌易感性无关。

Fas基因；Fasl基因；多态性；肺癌；易感性

肺癌是全球肿瘤相关性死亡的主要病因之一。有数据显示，2012年在全世界范围内新增肺癌患者达180万例，占全部肿瘤新发病例的13%。2012年死于肺癌的患者数达159万例，占全球肿瘤相关性死亡总人数的1/5，严重影响人们健康水平［1］。肺癌的发生是集环境、生活方式和遗传背景等多因素共同作用下的多阶段过程，然而其早期症状隐匿，缺乏有效早期诊断手段，导致大部分患者发现时已是中晚期。Fas及其受体基因Fasl是凋亡诱导家族的重要成员，可以直接启动细胞凋亡信号途径。Fas蛋白表达下调或者Fasl表达上调均可导致肿瘤的发生。在Fas和Fasl基因启动子区上存在着遗传多态性，可以影响其表达水平，进而影响肺癌患者的个体易感性。目前研究较多的是Fas-1377 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多态性与肺癌易感性之间的关系，但是Fas-670 A＞G与中国人肺癌易感性关系，以及和Fasl-844 T＞C 基因多态性的联合作用尚不清楚，本研究对此进行初步探讨。

1　资料和方法

1.1研究对象

患者组选取大连医科大学附属第一医院2010—2015年具有明确病理诊断的早期肺癌患者400例，对照组选择同期的健康体检者，按照同性别，年龄±5岁进行匹配。按照WHO吸烟者定义，将连续或累积吸烟6个月或以上者定义为吸烟者。

1.2样本采集和DNA制备

所有实验对象均空腹采集静脉血5 mL，采用EDTA抗凝，混匀后于－70 ℃冰箱保存，并同时对研究对象进行基本信息调查，包括年龄、性别及吸烟状况等。DNA的提取采用经典酚氯仿法进行DNA萃取，紫外分光光度法测定DNA的纯度和浓度，并将DNA浓度调整至50 ng/μL。

1.3基因分型

采用TaqMan荧光探针法进行基因分型，按照试剂盒说明进行操作，结果在ABI 7500基因分析仪上进行检测。采用SDS 2.2.1进行基因分型结果判定。总的反应体系为10 μL，包括：2×Master Mix 5 μL，DNA 1 μL，80×探针引物0.2 μL，双蒸水3.8 μL。反应条件为：95 ℃预变性10 min，92 ℃变性30 s，60 ℃退火延伸1 min，共45个循环。质量控制采取随机抽取10%的样品进行重复检测的方法。Fas-670 G＞A 和Fasl-844 T＞C基因多态性检测探针和引物设计序列见表1。

1.4统计学处理

采用SPSS 16.0软件进行统计分析，用Pearson χ2进行分类资料的相关统计分析，两样本t检验比较两组连续变量的差异，logistic回归分析进行校正分析。相对风险采用比值比（OR）及其95%可信区间（CI）进行表示。

表1　Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多态性检测探针和引物设计序列Tab.1　The probes and primer sequences in detecting gene polymorphisms of Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C

2　结　果

2.1纳入研究对象基本特征

患者组分型失败14例，对照组分型失败6例，因此共有386例肺癌患者和394例健康对照纳入到最终的分析中。患者组男性274例，女性112例，平均年龄58.1岁；对照组男性286例，女性108例，平均年龄57岁。两组间年龄和性别分布差异无统计学意义（P＜0.05）。患者组吸烟者286例，对照组235例，患者组显著高于对照组（表2）。

2.2Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C基因型的分布及其与肺癌易感性之间的关系

Fas和Fasl基因各基因型在患者组和对照组中的分布见表3。Fas基因的AA、AG和GG基因型在对照组中的分布频率分别为40.4%、46.7%和12.9%，符合遗传平衡定律（χ2=0.04，P=0.84），与实验组频率分布差异无统计学意义（χ2=1.52，P=0.47）；Fasl基因的TT、TC和CC基因型在对照组中的分布频率分别为52.5%、37.3%和10.2%，符合遗传平衡定律（χ2=3.22，P=0.07），在实验组中的分布频率分别为38.1%、46.6%和15.3%，与实验组频率分布差异有统计学意义（χ2=7.49，P=0.02）。

Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C与肺癌易感性之间的关系见表3。与Fas基因的AA基因型携带者相比，GA和GG基因型携带者肺癌发病风险未显著增加，按照隐性遗传模型进行比较，亦未发现GG基因型携带者肺癌易感性显著高于AA+GA基因型携带者。与Fasl基因TT基因型携带者相比，CT和CC基因型携带者患肺癌的风险显著升高，调整年龄、性别和吸烟状态后，OR值分别为1.37和1.74。

2.3Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C联合作用

经分析发现，同时携带Fas-670 GG基因型和Fasl-844 C等位基因个体肺癌易感性是携带Fas-670 A等位基因和Fasl-844 TT基因型个体的1.96倍（95%CI：1.16～3.32，表4）。

表2　纳入研究对象基本特征Fig.2　The characteristics of the patient group and control group

表3　Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C与肺癌易感性之间的关系Fig.3　The relationship between the distribution of Fas-670 A＞G and Fasl-844 T＞C，and lung cancer susceptibility　n（%）

表4　Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C联合作用Tab.4　The function of the combination of Fas-670 A＞G and Fasl-844 T＞C　n（%）

3　讨　论

细胞凋亡和增殖失衡是肿瘤形成的重要作用机制之一。Fas基因及其受体基因Fasl是凋亡诱导家族的重要成员，两者的相互作用可以直接启动细胞凋亡信号途径。一般情况下，Fas在多种组织细胞中表达稳定，Fasl表达非常局限，只有在受到外界刺激下其表达水平才会迅速增加。基于此原因，本研究探索了Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C多态位点与肺癌易感性之间的关系，结果发现，Fasl-844 CT和CC基因型携带者患肺癌风险显著增高，Fas-670 A＞G多态可能与肺癌易感性无关，但是同时携带Fas-670 GG和Fasl-844 CT/CC基因型的个体易感性更高。

Fas-670 G等位基因在健康人中的频率为0.36，与我国之间的研究报道结果一致［2-3］，显著低于韩国以及我国台湾省的数据［4-5］，Fasl-844 C等位基因在健康人中的频率为0.29，与我国以往的研究报道结果相似［2-5］。Fas-670 A＞G 和Fasl-844 T＞C多态各基因型在对照组的分布均符合遗传平衡定律，表明本研究的对照组具有较好的代表性。

到目前为止，已有许多关于Fas-1377 G＞A 和FasL-844 T＞C基因多态性与肿瘤易感性关系的研究报道［2-6］，但是只有少量的文章关于Fas-670 A＞G多态性与肺癌易感性关系的研究。Fas-670位点位于该基因的启动子区，A碱基被G碱基替代后导致Fas基因启动子活性降低，进而使基因的表达减弱，导致Fas介导的细胞凋亡功能减弱，增加肿瘤发生风险［7］。Shao等［8］在研究中发现，Fas-670 AG或者GG基因型携带者具有更高的前列腺癌易感性。然而，在我国台湾省报道的一项关于宫颈癌的研究中发现，Fas-670 A等位基因携带者具有更高的易感性［5］。本研究未发现该多态性与肺癌易感性显著相关，这与之前的肺癌研究结果一致［4］。Fasl-844位点同样位于基因的启动子区，T碱基被C碱基替代后导致Fasl基因启动子活性升高进而基因表达增强，肿瘤发病风险升高。Park等［4］的研究发现，Fasl-844 C＞T多态与韩国人肺癌发病风险无关。然而，在我国南方地区的研究发现，CC基因型携带者肺癌易感性显著升高［9］，于此相同，本研究发现，校正年龄、性别和吸烟状态后，CT和CC基因型携带者发病风险分别是TT基因型携带者的1.37和1.74倍。这些不同结果可能是因为：第一，不同人种的遗传背景不同，各等位基因频率在不同的人群中的分布不同；第二，不同肿瘤类型的发病机制不同，基因多态性在不同肿瘤类型中发挥的作用亦不相同。

本研究进一步分析了在肺癌易感性中，Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多态性的联合作用，同时携带Fas-670 GG基因型和Fasl-844 C等位基因个体肺癌易感性是携带Fas-670 A等位基因和Fasl-844 TT基因型个体的1.96倍，表明两者在肺癌的发生中可能存在联合作用。

综上所述，Fasl-844 T＞C可能与肺癌易感性相关，Fas-670 G＞A可能与肺癌易感性无关，本研究的结果尚需更大样本量的研究进一步验证。

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A study on the relationship between Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms and the susceptibility to lung cancer

HAN Jun1，SHAO Shujuan2，SUN Bing3（1.Department of Anesthesiology，the 1stHospital Affiliated to Dalian Medical University，Dalian 116011，Liaoning Province，China；2.Department of Histology and Embryology，Dalian 116044，Liaoning Province，China； 3.Department of Thoracic Surgery，the 1stHospital Affiliated to Dalian Medical University，Dalian 116011，Liaoning Province，China）

Correspondence to: SUN BingE-mail: junhan_1981@126.com

Background and purpose： Lung cancer is one of the leading causes of cancer death in the world.The aim of this study was to evaluate whether Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms were associated with the risk of lung cancer.Methods： Data from 400 lung cancer patients with specifc histological diagnosis were collected from 2010 to 2015.Meanwhile，data from matched healthy controls with the same gender and ±5 years were also collected.The genotypes of Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms were determined by TaqMan fuorescent probe method，and the results were analyzed using SPSS 16.0 software.Results： A total number of 386 cases and 394 controls were successfully genotyped.Compared with AA genotype of Fas gene，the GA and GG genotype carriers had no signifcantly increased risk of lung cancer.The OR values were 1.05 （95%CI: 0.77-1.44） and 0.77 （95%CI: 0.81-1.99） respectively.Compared with TT genotype of Fasl gene，the CT and CC genotype carriers had signifcantly increased risk of lung cancer.The OR values were 1.37 （95%CI: 1.01-1.86） and 1.74 （95%CI: 1.09-2.77），respectively.Conclusion： Fasl-844 T＞C polymorphism may be involved in lung cancer risk but not Fas-670 G＞A polymorphism.

Fas gene；Fasl gene；Polymorphism；Lung cancer；Susceptibility

10.19401/j.cnki.1007-3639.2016.07.006

R734.2

A

1007-3639（2016）07-0596-05

国家自然科学基金面上项目（81470367）。

孙 兵 E-mail:junhan_1981@126.com

2016-01-29

2016-03-31）