向俊蓓，陈　强，万　谦

(1.四川护理职业学院　科研处，成都 610100；2.四川新生命干细胞科技股份有限公司　研发中心，成都 610036)



针对代次较多的3T3-L1细胞诱导分化法的改良

向俊蓓1，陈强2，万谦2

(1.四川护理职业学院科研处，成都 610100；2.四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心，成都 610036)

3T3-L1细胞; 诱导分化; 传代次数

小鼠前脂肪细胞3T3-L1在特定的诱导条件下，可以分化为成熟的脂肪细胞，因此，3T3-L1常被作为研究与脂肪相关疾病(肥胖、糖尿病等)的模型细胞，而诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞是开展上述研究的前提。

本实验室的3T3-L1已被传代10次左右，用经典方法诱导时也遇到了细胞卷边和收缩严重的问题。结合上述报道的内容，我们适当改良了经典诱导方法，该方法适用于多次传代的3T3-L1的诱导。

1　材料与方法

1.1材料

小鼠前脂肪细胞3T3-L1购自四川大学华西医学中心细胞库，开始本研究时已经传代约10次。

1.2试剂和耗材

3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、地塞米松(Dex)、胰岛素(Ins)、油红、明胶和二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma；DMEM高糖培养液、牛血清、细胞培养用双抗(青霉素和链霉素)和磷酸缓冲液PBS购自成都哈里公司；细胞培养用24孔板购自成都溶海公司；IBMX和Dex溶解于DMSO，分别配制成1 000×(0.5 mol/L IBMX和1×10-3mol/L Dex)母液，Ins用0.02 mol/L盐酸配制成100×1 g/L(母液)。

1.3诱导3T3-L1分化的经典方法

1.4诱导3T3-L1分化的改良方法

2　结果

(a)启动分化3 d后不同条件下的大尺寸的细胞分化状态对比

图1(b)和图1(c)中，箭头所指为代表性的分化成功的成熟脂肪细胞；图中标尺代表100 μm。

(b)启动分化12 d后的改良诱导法同时无明胶处理的分化图

(c)启动分化12 d后的改良诱导法同时有明胶处理的分化图图1　采用经典诱导法和改良诱导法同时有或无明胶处理条件下的3T3-L1分化过程的比较

2.2使用明胶处理后3T3-L1分化成功率提高

图2为油红染色图。由图1(a)、图1(c)和图2可见，同样使用改良的诱导法，使用明胶处理后，3T3-L1被成功分化为成熟脂肪细胞的比率更高。

(a)改良的诱导法同时无明胶条件下的3T3-L1

(b)改良的诱导法同时有明胶条件下的3T3-L1图2　分化15 d后的油红染色图

3　讨论

本研究对于小鼠前脂肪细胞3T3-L1的经典诱导法进行了改良。经实验验证，改良后的诱导法能有效避免在诱导分化之初发生的细胞卷边和严重收缩，同时分化成功率也获得提高。改良方法至少对于传代次数在10次左右的3T3-L1细胞，具有一定的实用性。

文献[4-5]提到了3T3-L1细胞传代次数对成功分化的影响，建议使用传代次数低的细胞，但是实验室往往有诸多现实的问题，马上换用传代次数低的3T3-L1细胞有困难。本实验室的3T3-L1细胞就大约有10次左右的传代，不过通过改良经典的诱导法，还是成功获得了细胞的分化。所以本研究呈现的改良诱导法对于传代次数较多的3T3-L1细胞可以一试。

改良经典的诱导方法并不是本实验室首创，文献[6]利用正交试验，考察了联合诱导时IBMX、Dex和Ins用量以及联合诱导时间，Ins单独诱导时间以及Ins用量对3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞的影响，其与本文的改良方面虽有所不同，但同样是对经典诱导法进行了改变。

4　结束语

本研究通过改良经典的诱导法，对于传代次数较多的3T3-L1细胞获得了比较令人满意的结果，希望对在诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞方面遇到困难的操作者有一定的参考价值。

[1]胡锐，李宝莉，赵勤，等.葛根素对3T3-L1 前脂肪细胞分化及胰岛素抵抗模型糖代谢的影响[J].中药药理与临床，2012，28( 3)：41-43.

[2]风信子1013.3T3-L1诱导分化时细胞飘起来[EB/OL].[2014-08-26].http://www.dxy.cn/bbs/thread/30731437#30731437.

[3]bbs.bbioo.com.3T3-L1脂肪细胞诱导分化问题(脂肪细胞，传代)[EB/OL].[2014-12-21].http://www.bbioo.com/experiment/18-391959-1.html.

[4]WO xiamfei1.[求助]3T3-L1诱导分化遇到困难！[EB/OL].[2005-07-04].http://www.dxy.cn/bbs/topic/3744147?ppg=2.

[5]APANGHUANG.3T3-L1细胞诱导分化[EB/OL].[2014-09-02].http://www.doc88.com/p-5873021860696.html.

[6]王友升，田元元，蔡琦玮.前体脂肪细胞3T3-L1诱导分化条件的优化[J].食品科学技术学，2014，32(3)：38-42.

Modification of the Inducing Method for the Differentiation of 3T3-L1 Cells with High Frequency of Doubling Towards Mature Adipocytes

XIANG Junbei1，CHEN Qiang2，WAN Qian2

(1.Research Department，Sichuan Nursing Vocational College，Chengdu 610100，China;2.Research and Developmen Center SichuanNeo-Life Stem Cell Biotech Inc，Chendu 610036，China)

3T3-L1 cells; induced differentiation; cell doubling

2015-02-26；修改日期: 2015-03-18

四川护理职业学院院级重点课题(2014010)；成都中医药大学实验技术重点项目(063003)；成都中医药大学校基金项目 (ZRMS201248)；2014年四川省科技厅科技支撑计划项目 (2014SZ0122)。

向俊蓓(1983-)，女，博士，讲师，主要从事分子生物学方面的研究。

R331

A

10.3969/j.issn.1672-4550.2016.04.09