朱丽萍，于　威,b，陈　滨,b，何　欢,b，解纯刚,b

(浙江理工大学，a.生物化学研究所；b.浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018)



家蚕杆状病毒(BmNPV)Bm122基因的缺失影响芽生型病毒粒子的形成

朱丽萍a，于威a,b，陈滨a,b，何欢a,b，解纯刚a,b

(浙江理工大学，a.生物化学研究所；b.浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018)

为研究家蚕杆状病毒(BmNPV)编码的Bm122基因的生物学功能，利用Red重组技术和Bac-to-Bac系统分别构建了Bm122-ko-bacmid和Bm122-re-bacmid，实现对Bm122基因的敲除和异位补回。进而将Bm122-ko-bacmid、Bm122-re-bacmid、wtbacmid(野生型)分别转染BmN细胞，病毒滴度测定结果显示：Bm122缺失后，病毒无法形成正常水平的芽生型病毒粒子(budded virus，BV)，表明该基因是病毒生成有感染力的BV所必需的基因；透射电子显微镜观察发现，Bm122敲除后细胞内未观察到杆状病毒粒子，进一步证实Bm122的缺失影响了BV的生成。qPCR结果显示，Bm122缺失后病毒DNA复制水平降低。结果表明，Bm122是病毒生成正常水平的BV所必需的基因。

家蚕杆状病毒；Bm122基因；Red重组技术；Bac-to-Bac系统；病毒复制

0　引　言

杆状病毒是一类在自然界中仅感染节肢动物的病毒。杆状病毒基因组为共价闭合环状DNA，基因组大小在80～180 kb之间。根据ICTV网站上发布的最新分类，杆状病毒分为α、β、δ、γ杆状病毒属。病毒粒子分为包涵体来源型病毒粒子(occluded virions，ODV)和芽生型病毒粒子(budded virions，BV)，两种不同表型的病毒粒子产生于病毒感染周期的不同时期，产生的细胞部位和形态结构也不同[1]。对家蚕杆状病毒(Bombyxmorinucleopolyhedro virus，BmNPV)的核酸序列分析表明，它与苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒(Autographacalifornicamultiple nuclear polyhedrosis virus，AcMNPV)序列同源性高达90 %，但它们的宿主截然不同。……