赵善成，王振，程咏梅，陈敬华*，2（.江南大学药学院，江苏无锡2422；2.江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏无锡2422）

一种SUMO-Heparinase I融合酶的可溶性表达与纯化

赵善成1，王振1，程咏梅1，陈敬华*1，2
（1.江南大学药学院，江苏无锡214122；2.江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122）

克隆自肝素黄杆菌（Flavobacteriumheparinum）的肝素酶I（Heparinase I，EC4.2.2.7）广泛应用于低相对分子质量肝素（LMWH，low molecular weight heparin）制备研究。然而，该酶在大肠杆菌表达体系中易形成包涵体，限制了其大量应用。将可溶性配体SUMO（small ubiquitin-like modifier，小泛素类似修饰蛋白质）与C端带有6×His标签的肝素酶基因片段N-端融合表达，菌体总蛋白质和可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳表明，N端融合SUMO的肝素酶I可溶性表达比率显著提高；通过镍-亲和柱层析得到均一纯化的融合肝素酶I，融合酶酶学性质表明该融合酶可直接应用于肝素降解而无需切除SUMO标签，为肝素酶I的广泛应用提供了良好的技术基础。关键词：肝素酶I；小泛素类似修饰蛋白质；融合表达；可溶性表达

肝素酶是一类特异性降解肝素和类肝素多糖的裂解酶，可用于病人体外治疗血液中残存肝素的有效去除、血液肝素浓度水平的测定、肝素类多糖的序列分析，以及真核细胞表面肝素类多糖的结构-功能研究［1-3］。其中，肝素酶I降解肝素制备低相对分子质量肝素以质量高、条件温和、易控制和环境友好等优点［4］，受到了研究人员越来越多的关注。

相较于肝素黄杆菌发酵法制备肝素酶I，采用pET表达系统在大肠杆菌中重组表达肝素酶I，可显著提高肝素酶I的产量和产品纯度［5］。……