徐晓桐， 程 松， 张小莉， 张满生， 潘英妮， 刘晓秋*（.沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳006；.海南慧谷药业有限公司，海南海口5703）



枫蓼肠胃康片质量标准的研究

徐晓桐1， 程 松1， 张小莉1， 张满生2， 潘英妮1， 刘晓秋1*
（1.沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016；2.海南慧谷药业有限公司，海南海口570311）

目的 建立枫蓼肠胃康片 （牛耳枫和辣蓼）的质量标准。方法 TLC法鉴定牛耳枫和辣蓼，HPLC法同时测定芦丁和原儿茶酸的含有量。结果 TLC斑点清晰，阴性无干扰。芦丁和原儿茶酸分别在4～128μg/mL（r=0.999 7）和2～64μg/mL（r=0.999 5）范围内线性关系良好，平均回收率分别为101.6%（RSD=2.1%）和98.7%（RSD= 2.0%）。结论 该方法简便准确，重复性好，适用于枫蓼肠胃康片的质量控制。

枫蓼肠胃康片；牛耳枫；辣蓼；芦丁；原儿茶酸

枫蓼肠胃康片是由牛耳枫和辣蓼2味药材加水煎煮，浓缩得浸膏，再加入蔗糖、糊精等辅料制成，用于治疗急慢性肠胃炎［1］。方中牛耳枫为交让木属植物牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth.的全草，具有清热解毒、活血舒筋的功效，用于感冒发热，无名肿毒等；辣蓼为蓼属植物水蓼Polygonum hydropiper Linn.的全草，有导滞化湿、祛风止痒、化瘀解毒之功效，前者主要含黄酮、生物碱和酚酸类成分［2-5］，而后者主要含黄酮类成分［6］。现有部颁标准中的鉴定方法规定了黄酮类成分的盐酸-镁粉反应和生物碱类成分的沉淀反应，罗杰等［7］以市售辣蓼为对照进行鉴别，芦丁为指标进行含有量测定，对枫蓼肠胃康片进行了质量控制，另有文献报道采用HPLC法检测了其中没食子酸［8］或芦丁［9-11］含有量。经与对照品比对发现，牛耳枫中的黄酮类成分主要是芦丁，而酚酸类成分主要是原儿茶酸；辣蓼中的黄酮类成分 （如芦丁）主要分布于叶中，在茎中的含有量极少［12-13］，而目前应用辣蓼以茎为主要部分，叶部分很少，故芦丁在辣蓼中几乎检测不到。由于缺少对枫蓼肠胃康片全面控制的质量研究，故本实验在对其化学成分进行分析的基础上，以牛耳枫为对照鉴别其中生物碱类成分，以没食子酸为对照鉴别辣蓼，HPLC法同时测定芦丁和原儿茶酸的含有量，可为有效控制该药物的质量提供依据。

1　材料

1.1仪器 LC-10AB高效液相色谱仪，包括SPD-10PDA检测器（日本岛津公司）；DZKW电子恒温水浴锅 （北京永光明医疗仪器厂）；AB135-S十万分之一电子天平（瑞士Mett1er-To1edo公司）；SG3200H超声清洗仪 （150 W、40 kHz，上海冠特超声仪器有限公司）。

1.2试药与样品 硅胶GF254（青岛海洋化工有限公司）；甲醇、甲酸为分析纯 （天津市大茂化学试剂厂）；娃哈哈纯净水 （杭州娃哈哈集团有限公司）；乙腈为色谱纯 （天津市康科德科技有限公司）。芦丁 （批号 080-9303）、原儿茶酸 （批号9WLS-KM8J）、没食子酸（批号SXE9-TD03）、牛耳枫（批号G2UG-VANF）对照品或药材（中国食品药品检定研究院）。市售枫蓼肠胃康制剂，共9批 （由 3家企业生产，批号分别为 130806、130902、140104、130302、130601、131001、130803、131004、131101，规格分别为0.2、0.2、0.2、0.5、0.5、0.5、0.24、0.24、0.5 g/片）；3批自制品 （批号分别为140911、140915、140920，规格分别为0.3、0.5［批号140911有两个规格］、0.3、0.3 g/片）。牛耳枫和辣蓼药材 （海南慧谷药业有限公司）。

2　方法与结果

2.1TLC鉴别

2.1.1牛耳枫

2.1.1.1供试品溶液的制备 取本品 （批号130806、130302、130803）研细，各称取约0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加1%盐酸-甲醇溶液20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5 mL，浓氨调节pH值至11～12，乙酸乙酯振摇提取3次，每次5 mL，合并萃取液，挥干，残渣加甲醇1 mL溶解，即得。

2.1.1.2对照药材溶液的制备 称取牛耳枫1 g，按 “2.1.1.1”项下方法制备，即得。

2.1.1.3阴性对照溶液的制备 按处方称取辣蓼0.5 g，按制剂工艺制得牛耳枫阴性对照制剂，按“2.1.1.1”项下方法制备，即得。

2.1.1.4方法和结果 吸取对照药材、供试品和阴性对照溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液 （20∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，结果见图1A。由图可知，供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色斑点，阴性样品无干扰。

2.1.2辣蓼

2.1.2.1供试品溶液的制备 取本品 （批号同“2.1.1.1”项）研细，各称取约0.5 g，加甲醇10 mL，回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸溶液2 mL溶解，盐酸饱和的乙醚振摇提取2次，每次10mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL溶解，即得。

2.1.2.2对照品溶液的制备 称取没食子酸适量，加甲醇制成每1 m L含0.5 mg对照品的溶液，即得。

2.1.2.3阴性对照溶液的制备 按处方称取牛耳枫1 g，按制剂工艺制得辣蓼阴性对照制剂，按“2.1.2.1”项下方法制备，即得。

2.1.2.4方法和结果 分别吸取对照品、供试品和阴性对照溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸 （5∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，结果见图1B。由图可知，供试品在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色斑点，阴性样品无干扰。

图1　TLC色谱图Fig.1 TLC chromatogram s

2.2含有量测定

2.2.1色谱条件 Agi1ent C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液 （B），梯度洗脱 （0～25 min，85%～80%B；25～35 min，80%～60%B）；体积流量0.8 mL/min；检测波长254 nm；柱温室温。

2.2.2混合对照品溶液的制备 精密称取120℃下干燥至恒重的对照品芦丁3.2 mg和原儿茶酸1.6 mg，置于10 mL量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取适量，流动相分别制成含芦丁、原儿茶酸4、2，8、4，16、8，32、16，64、32，128、64μg/mL的溶液。

2.2.3供试品溶液的制备 取本品研细，精密称取1.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，回流提取1 h，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4牛耳枫阴性对照溶液的制备 按处方取辣蓼，按制备工艺制备阴性样品，按 “2.2.3”项下方法制备，即得。

2.2.5阴性干扰实验 吸取混合对照品、供试品和阴性对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。由图可知，阴性样品不干扰测定。

图2　HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram s

2.2.6线性关系考察 在 “2.2.1”项色谱条件下，精密吸取上述混合对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪测定。以质量浓度为横坐标 （C）、峰面积为纵坐标 （A）绘制标准曲线，得芦丁回归方程A=2.869×104C+1.670×105，r=0.999 7，在4～128μg/mL范围内呈良好的线性关系；原儿茶酸回归方程A=4.192×104C+1.407×105，r= 0.999 5，在2～64μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.7精密度试验 取混合对照品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下，精密吸取20μL，连续进样6次，测得芦丁和原儿茶酸峰面积RSD分别为1.5%和1.4%，表明仪器精密度良好。

2.2.8稳定性试验 取供试品溶液 （批号140911），于0、2、4、6、8和24 h精密吸取20μL，注入液相色谱仪，测得芦丁和原儿茶酸峰面积RSD分别为1.2%和1.5%，表明溶液在24 h内稳定。

2.2.9重复性试验 取本品 （批号140911）研细，精密称取6份，置于具塞锥形瓶中，按“2.2.2”和 “2.2.3”项下方法制备混合对照品和供试品溶液。各吸取20μL，注入液相色谱仪，测得芦丁和原儿茶酸含有量RSD分别为2.2%和1.8%，表明该方法重复性良好。

2.2.10回收率试验 取本品 （批号140911），研细，精密称取6份，每份0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，再分别精密加入0.802mg/mL芦丁对照品溶液1 mL和1.601 mg/mL原儿茶酸对照品溶液1 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液。在 “2.2.1”项色谱条件下，吸取20μL，注入液相色谱仪中测定，结果见表1。2.2.11 含有量测定 对9批市售和3批自制制剂进行测定，结果见表2。由表可知，芦丁含有量为0.372～1.410 mg/片，而原儿茶酸为0.057～ 1.503 mg/片。同时，自制品中芦丁含有量比市售低，但原儿茶酸比市售高。

表1　回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

表2　含有量测定结果Tab.2 Results of content determ ination

3　讨论

牛耳枫主要含生物碱类、黄酮类和酚酸类成分［5，14］，其中生物碱是牛耳枫中的代表性成分，故本实验建立了以牛耳枫为对照的鉴别生物碱类成分的TLC法，专属性强；辣蓼主要含鞣质类、黄酮类和挥发油类成分，由于本方提取工艺是水煎，故未设计挥发性物质的鉴别。没食子酸是辣蓼中的主要成分，具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物活性［15］，与本品功效一致，而且牛耳枫中不含此成分，具有专属性，故本实验以没食子酸为对照品，采用TLC法鉴别处方中的辣蓼。

本品主要功效是治疗急性肠胃炎，方中牛耳枫是君药，主要成分为黄酮类、酚酸类和生物碱类，而且黄酮类和酚酸类的抗炎、抗菌作用与本品功效一致。由于芦丁是牛耳枫中主要的黄酮类成分，而原儿茶酸是牛耳枫中主要的酚酸类成分，故选择两者作为含有量测定指标［16-17］。

文献 ［18-19］报道，辣蓼中含有芦丁。由于药材在采集晾干后，叶子很容易与茎分离，而且易碎，故使用茎较多。另外，所测定的芦丁来自牛耳枫，而在辣蓼中很难检测到，故鉴别芦丁时无干扰。

枫蓼肠胃康片市售品与自制品比较，芦丁含有量远高于自制品，但原儿茶酸含有量远低于后者，可能是药材来源不同所致。另外，尽管芦丁是牛耳枫的主要成分，但仅以其为指标成分进行测定时专属性不强，易导致掺假行为。个别市售制剂中原儿茶酸含有量偏低，推测可能市售与自制制剂中被测成分的转移率不同，或按照现有提取工艺，在提取液浓缩成浸膏时采用80℃减压浓缩。实验表明，若浸膏置于80℃减压干燥箱中3 h，原儿茶酸含有量从3.3 mg/g下降到1.5 mg/g，而且原儿茶酸在高温下会分解，释放出CO2，导致含有量降低。因此，制剂中间体浸膏的干燥温度对主药有效成分影响很大，应注意制药工程关键环节的质量控制。

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Quality standard for Fengliao Changweikang Tablets

XU Xiao-tong1， CHENG Song1， ZHANG Xiao-1i1， ZHANGMan-sheng2， PAN Ying-ni1， LIU Xiaoqiu1*

（1.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；2.Hainan Huigu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Haikou 570311，China）

AIM To estab1ish the qua1ity standard for Feng1iao Changweikang Tab1ets（Daphniphyllum calycinum Benth.and Polygonum hydropiper Linn.）.METHODS TLC was used for identifying D.calycinum and P. hydropiper.HPLC was app1ied to simu1taneous1y determining the contents of rutin and protocatechuic acid.RESULTS TLC showed c1ear spots，free from interference from the negative reference.Rutin and protocatechuic acid disp1ayed good 1inear re1ationships within the ranges of 4-128μg/m L（r=0.999 7）and 2-64μg/mL（r=0.999 5）.The average recoverieswere101.6%（RSD=2.1%）and 98.7%（RSD=2.0%），respective1y. CONCLUSION This simp1e，accurate and reproducib1emethod qua1ifies for the qua1ity contro1of Feng1iao Changweikang Tab1ets.

Feng1iao Changweikang Tab1ets；Daphniphyllum calycinum Benth.；Polygonum hydropiper Linn.；rutin；protocatechuic acid

R927.2

A

1001-1528（2016）06-1289-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.018

2015-11-26

徐晓桐 （1992—），男，硕士生，从事中药炮制研究。Te1：（024）23986469，E-mai1：18809896263@163.com

刘晓秋 （1964—），女，博士，教授，从事中药药效物质基础及质量控制研究。Te1：（024）23986469，E-mai1：1iuxiaoqiu3388@126.com