锁琳琅 刘文辉 黄晓璐 李青峰

·论著·

应用H3K4B经皮肤进行siRNA传递的实验研究

锁琳琅 刘文辉 黄晓璐 李青峰

目的 探讨一种高效率、低毒性的经皮肤siRNA传递方式。方法 在含血清条件下，利用不同浓度梯度的H3K4B或10 KDa聚乙烯亚胺（PEI，阳性对照）将含有荧光标记的siRNA转染到原代成纤维细胞内，并在转染24 h后以流式细胞仪检测各浓度下H3K4B和PEI转染siRNA的效率，确定两者的最适转染浓度。采用CCK-8法检测并比较H3K4B和10 KDa PEI在最适转染浓度下的细胞毒性。使用皮内注射将siRNA-H3K4B复合物转染进大鼠皮肤内，转染6 h、24 h、48 h和72 h后采集皮肤样本进行冷冻切片，荧光显微镜下观察siRNA是否成功传递到皮肤内。结果 在含血清条件下，H3K4B和10 KDa PEI的最佳转染效率比为1∶4。CCK-8实验证实，H3K4B的毒性低于10 KDa PEI。皮内注射能将siRNA-H3K4B复合物转染进全层皮肤内，但主要将复合物转染至真皮内，少量siRNA传递至表皮。结论H3K4B能高效地将siRNA传递至皮肤内，且毒性较低；皮内注射能协助传递过程，siRNA主要被传递至真皮内。

小干扰RNA 皮内注射 脂质体 经皮给药

利用小干扰RNA（siRNA）对各种疾病进行基因治疗，已成为新的研究方向，特别是在遗传性疾病的治疗方面［1-2］。皮肤是局部应用siRNA进行治疗最方便的器官［3］，经皮肤进行siRNA传递可以将siRNA传递到皮肤或体内其他靶器官，是一种非常有前景的治疗皮肤［4-6］乃至全身疾病［7-8］的方法。使用皮肤传递siRNA的优点在于：①全身毒性小；②生物利用率高；③治疗区域容易进行监测、取材或手术切除［2-3］。对于皮肤相关疾病，经皮siRNA传递更具备直接进入靶细胞，且对治疗以外区域影响较小的优点。……