曾昭伟 ，王学谦，常艳敏

(天津市南开医院，天津300100)



妊娠早期孕妇血清PAPP-A水平观察

曾昭伟 ，王学谦，常艳敏

(天津市南开医院，天津300100)

目的观察孕早期妇女血清妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平变化。方法采用基于免疫微球标记的化学发光法检测160份孕8～14周妇女血清标本中的PAPP-A，并比较不同年龄、体质量指数(BMI)的孕12周妇女血清PAPP-A水平。结果孕8、9、10、11、12、13、14周孕妇中位血清PAPP-A水平分别为0.37、0.89、1.76、2.85、4.53、7.29、10.46 μg/mL，孕早期血清PAPP-A水平随孕周增加而增高(P均<0.05)。孕12周孕妇中，年龄≤25岁、>25～30岁、>30～35岁、>35岁孕妇血清PAPP-A水平分别为(4.78±0.43)、(5.02±0.38)、(4.28±0.29)、(3.62±0.18)μg/mL，其中年龄>35岁者血清PAPP-A水平低于年龄≤25岁、>25～30岁、>30～35岁者(P均<0.05)；BMI 16～19者、>19～24者、>24者血清PAPP-A水平分别为(6.36±0.81)、(5.79±0.66)、(4.70±0.45)μg/mL，其中BMI>24者血清PAPP-A水平高于BMI 16～19者、>19～24者(P均<0.05)。结论孕早期妇女血清PAPP-A水平随孕周增加而增高，高龄者(年龄>35岁)和高BMI者(BMI>24)血清PAPP-A显著降低；在校正孕妇BMI、年龄等因素影响后，可得到更为精确的检测结果。

妊娠相关血浆蛋白A；妊娠早期；体质量指数；年龄；唐氏综合征

妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)是Lin等[1]于1974年在孕妇血清中发现并分离的特异蛋白，主要由胎盘合体滋养层和蜕膜细胞合成分泌[2]。研究[3]表明，PAPP-A可能特定细胞生长有关，血清PAPP-A是产前筛查的参考指标之一，目前多用于唐氏综合征(DS)的筛查[4，5]。在孕妇血清中，PAPP-A与嗜酸性主要碱性蛋白前体(proMBP)以异源四聚体的形式存在[6]。常规检测手段ELISA法的灵敏性和特异性不足，检测结果易受到孕妇年龄、体质量指数(BMI)等的影响[7]，且常规检测所用抗体未排除proMBP的固有干扰，因此在诊断DS方面不够精确。2015年4～8月，本研究采用基于微球的化学发光检测法，观察孕早期妇女血清PAPP-A水平变化，并分析孕妇年龄和BMI对PAPP-A检测结果的影响，现报告如下。

1　材料与方法

1.1试剂与仪器PAPP-A检测超敏试剂盒(由本实验室建立)，离心机(型号Allegra X-22，贝克曼公司)，0.22 μm微孔滤膜(美国Millipore公司)，辣根过氧化物酶(HRP，美国GE公司)，牛血清白蛋白(天津北方天医化学试剂厂)，生物素、亲和素(Sigma公司)，Lica Research 化学发光分析仪(上海博阳生物技术有限公司)，96孔发光微孔板、链霉素亲和素包被供体球、受体微球(美国Perkin Elmer公司)，其余试剂为国产分析纯。

1.2孕早期妇女血清标本的来源及处理收集来院孕检的妇女孕8、9、10、11、12、13、14周的静脉血标本分别为8、15、20、32、56、16、13份，共计160份、每份4 mL。孕妇年龄19～40岁，平均年龄28.5岁，平均BMI为21.77，入选者均为早孕期8～14周，排除各种异常妊娠者(如异位妊娠、胎儿宫内发育迟缓、妊娠高血压综合征、子痫前期)及合并其他严重疾病者(如心血管疾病、关节炎)。将血液标本以3 000 r/min离心10 min，取上清，-80 ℃保存。

1.3血清PAPP-A检测采用基于微球标记的化学发光免疫法检测血清PAPP-A。PAPP-A标准品浓度分别为0、1、2.5、5、10、25、50 μg/mL，每瓶0.5 mL分装，4 ℃保存备用；利用基于PAPP-A特异表位的重组抗原免疫小鼠制备PAPP-A抗体；在带有滤膜的离心管中加入0.1 mg PAPP-A抗体，9 000 r/min离心8 min，缓冲液洗涤6次，在抗体液中加入受体微球0.5 mg、25 mg/mL的 氰基硼氢化钠(NaBH3CN) 10 μL、10%Tween-20 1.25 μL，加磷酸盐缓冲液(PBS)至100 μL，37 ℃振荡48 h；在离心管中加入另一标记抗体1 mg，9 000 r/min离心8 min，缓冲液洗涤6次，在50 μL抗体溶液中加入22 mg/mL的生物素5 μL，室温振荡20 h，用带有滤膜的离心管去除剩余生物素；在96孔板中加入生物素化抗体(1∶2 000)25 μL、受体球(1∶100)25 μL、血清样本25 μL，37 ℃孵育30 min；避光条件下加入175 μL供体微球，37 ℃孵育10 min，测定信号值。PAPP-A检测结果均以中位数(MOM)表示[8]。

2　结果

2.1不同孕周孕妇血清PAPP-A水平孕8、9、10、11、12、13、14周孕妇中位血清PAPP-A水平分别为0.37、0.89、1.76、2.85、4.53、7.29、10.46 μg/mL，孕早期血清PAPP-A水平随孕周增加而增加(P均<0.05)。

2.2不同年龄孕妇血清PAPP-A水平比较孕12周孕妇中，年龄≤25岁、>25～30岁、>30～35岁、>35岁孕妇血清PAPP-A水平分别为(4.78±0.43)、(5.02±0.38)、(4.28±0.29)、(3.62±0.18)μg/mL，其中年龄>35岁者血清PAPP-A水平低于年龄≤25岁、>25～30岁、>30～35岁者(P均<0.05)。

2.3不同BMI孕妇血清PAPP-A水平比较孕12周孕妇中，BMI 16～19者、>19～24者、>24者血清PAPP-A水平分别为(6.36±0.81)、(5.79±0.66)、(4.70±0.45)μg/mL，其中BMI>24者血清PAPP-A水平高于BMI 16～19者、>19～24者(P均<0.05)。

3　讨论

DS是一种最常见的染色体异常遗传性疾病，智力发育不全是该病最突出、最严重的表现，并伴有其他严重的先天性、多发性畸形[9]。DS已成为影响我国出生人口素质的重要因素之一，尽早诊断并终止妊娠可减轻社会负担、提高出生人口素质。

PAPP-A是金属结合蛋白酶锌指多肽超家族成员之一，分子量约为500 kD[10]。PAPP-A可以由不同类型的细胞分泌，组织分布非常广泛，在子宫内膜、黄体、前列腺、睾丸、心肌、肾脏等处均有分布。巨噬细胞、成纤维细胞、成骨细胞、骨髓基质细胞、血管平滑肌细胞及胎盘滋养层的合体细胞、蜕膜细胞、卵巢粒膜细胞等均具有合成PAPP-A的能力[11]。近年来研究[12]表明，孕妇血清PAPP-A水平异常可能与胎儿染色体异常、异位妊娠、先兆流产、胎儿宫内发育迟缓有关。研究[13]表明，母体血清PAPP-A异常低值与胎儿染色体数目和结构异常有关，PAPP-A是孕早期最常用的筛查指标之一，敏感筛查时间为孕8～14周。PAPP-A与AFP、β-HCG联合检测，可提高染色体疾病检出率，减少畸形儿出生率[14]。PAPP-A检测还为滋养层细胞疾病、妊娠高血压综合征等妊娠相关疾病的筛查提供重要参考，有助于孕妇加强防范，保证母婴健康。

目前PAPP-A常用的检测手段为ELISA法，但检测准确率尚不理想[15]，血清PAPP-A检测结果也易受到BMI[16]、年龄[17]以及单双胎[18]等多因素影响。为此，我们在制备PAPP-A特异抗体从而排除proMBP非特异干扰的基础上，利用灵敏性和准确性均较高的基于微球标记的化学发光法检测血清PAPP-A。我们选择了孕8～14周妇女的血清标本，检测结果显示，孕早期妇女血清PAPP-A水平随孕周增加而增加；在孕12周妇女中，高龄者(年龄>35岁)和高BMI者(BMI>24)血清PAPP-A显著降低，与国外研究结果相符[19]。因此，我们推测年龄、BMI等因素对血清PAPP-A检测结果有一定影响。

综上所述，PAPP-A检测虽不能做出诊断，但对胎儿无创伤，且对筛查出的高危人群可采取后续检查措施进一步确认，避免了对所有孕早期妇女进行有创检查。另外，血清PAPP-A水平也可间接反映胎儿宫内发育情况。但根据上述结果，我们认为PAPP-A检测结果必须对年龄、BMI等影响因素进行校正[20]，才能反映真实的血清PAPP-A水平。然而，本研究收集的血清标本量相对较小，上述观点有待后续扩大标本量进行验证。我们将利用本实验室建立的优良检测体系，根据孕妇年龄及BMI细化分组，校正影响因素，推算出适用于特定地区的个性化系数，建立孕早期血清PAPP-A正常范围，使PAPP-A检测更好地应用于临床产前筛查。

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天津市卫生局科技基金项目(2013KY24)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.027

R714.1

B

1002-266X(2016)19-0074-03

2015-12-08)