白美玲,刘星亮,张林西,李海军

(河北北方学院 1.基础医学院、2.附属第一医院神经内科、3.生命科学研究中心，河北 张家口　075000)



鱼藤素对食管癌EC-109细胞增殖的抑制作用及部分机制

白美玲1,刘星亮2,张林西3,李海军1

(河北北方学院 1.基础医学院、2.附属第一医院神经内科、3.生命科学研究中心，河北 张家口075000)

Inhibitory effect of deguelin on esophageal cancer EC109 cells and its mechanism

BAI Mei-ling1，LIU Xing-liang2, ZHANG Lin-xi3, LI Hai-jun1

(1.BasicMedicalCollege, 2.DeptofNeurologyoftheFirstAffiliatedHospital, 3.LifeSciencesResearchCenter,HebeiNorthUniversity,ZhangjiakouHebei075000,China)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.029

氧化应激；鱼藤素； Keap1-Nrf2通路; HO-1；食管癌；流式细胞术

氧化和抗氧化失衡在肿瘤发生发展过程中的作用被越来越多的学者所关注[1-2]。本实验拟通过安全有效的体外实验来观察鱼藤素在食管癌细胞中的作用效果，同时观察慢性氧化应激相关通路在其中的作用机制。

1　材料与方法

1.1药物与试剂鱼藤素(deguelin)购自Sigma公司，p-Akt兔抗人单克隆抗体、Nrf2兔抗人单克隆抗体、HO-1鼠抗人单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司。

1.2细胞培养人食管癌细胞株EC-109由河北北方学院生命科学研究中心惠赠。将复苏后的EC-109细胞分为对照组和鱼藤素组(浓度为20、40、80、160 nmol·L-1)进行实验。

1.3细胞增殖抑制的检测采用CCK-8法，各组分别设4个复孔，每组选取1×106个细胞作用24、48 h 后，波长为490 nm酶标仪测光密度值(OD)。

1.4检测细胞周期收集药物作用24h的各组细胞1×106个，离心，并按照说明书步骤通过流式细胞仪检测细胞周期。

1.5琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡用对照组和不同浓度鱼藤素药物组提取的DNA样品观察凋亡情况。

1.6蛋白质印迹法检测p-Akt、Nrf2和HO-1的表达各组加入蛋白裂解液提取总蛋白，分别加入一抗和二抗，DAB显色观察。

2　结果

各组作用24 h后，各药物组均可明显抑制EC-109细胞的增殖，且两者有协同作用。……