蔡黎丽, 徐　晟, 马　蕊, 汪　仁, 夏　冰,①

〔1. 江苏省中国科学院植物研究所(南京中山植物园), 江苏 南京210014； 2. 江苏省农业种质资源保护与利用平台, 江苏 南京210014〕



忽地笑γ-生育酚甲基转移酶基因LaTMT的克隆与表达分析

蔡黎丽1,2, 徐晟1, 马蕊1, 汪仁1,2, 夏冰1,2,①

〔1. 江苏省中国科学院植物研究所(南京中山植物园), 江苏 南京210014； 2. 江苏省农业种质资源保护与利用平台, 江苏 南京210014〕

采用RACE技术从忽地笑〔Lycorisaurea(L’Hér.) Herb.〕叶片中克隆获得γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因，命名为LaTMT。序列分析结果显示：该基因cDNA全长1 458 bp，其中开放阅读框(ORF)长1 017 bp，编码338个氨基酸残基。LaTMT基因编码蛋白质的理论相对分子质量37 560，理论等电点pI 8.70，为亲水性蛋白，无跨膜结构但具有信号肽结构；并具有S-腺苷甲硫氨酸(SAM)甲基转移酶保守结构域，包含3个SAM结合位点；该蛋白的二级结构中包含44.08%的α-螺旋、32.84%的无规则卷曲、12.72%的延伸链和10.36%的β-转角。序列比对和系统进化树分析结果显示：LaTMT蛋白属于S-腺苷甲硫氨酸-依赖性γ-生育酚甲基转移酶家族，与其他植物γ-TMT蛋白的一致性为64%～75%；在NJ系统树上，LaTMT蛋白与单子叶植物γ-TMT蛋白聚为同一大类，并与油棕(ElaeisguineensisJacq.)EgTMT和美洲油棕〔Elaeisoleifera(Kunth) Cortés〕EoTMT聚为同一类，亲缘关系最近。基因表达分析结果显示：LaTMT基因可在大肠杆菌中成功表达，且表达量随异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导时间的延长而增加；在忽地笑的根、叶片、花苞、子房、雄蕊、花瓣和鳞茎中LaTMT基因均可表达，其中在叶片中的相对表达量最高，在子房、雄蕊和鳞茎中的相对表达量相对较低，具有明显的组织特异性。研究结果表明：忽地笑LaTMT基因在进化过程中具有很高的保守性；……