董彬彬，夏海锋,2



三种混合模式色谱填料色谱性能的比较

董彬彬1，夏海锋1,2

（1江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122；2江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏 无锡 214122）

摘要:以γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷为中间活化剂，将3-氨基吡啶、2-巯基苯并咪唑和2-巯基-1-甲基咪唑3种杂环配基键合到粒径为5 μm、孔径为30 nm的球形硅胶上，制备3种高效疏水电荷诱导色谱填料。利用溶菌酶、牛血清白蛋白和免疫球蛋白G作为模型蛋白，考察其在3种不同配基色谱柱上的保留行为和分离行为。比较了3种不同性质的模型蛋白在不同色谱柱上的色谱性能的异同。发现以2-巯基-1-甲基咪唑为配基的色谱柱具有良好的pH控制色谱行为和良好的分离性能，初步验证了高效疏水电荷诱导色谱的分离模式及潜在应用。

关键词:生物分离；蛋白质；高效液相色谱；疏水电荷诱导色谱；保留因子；分离行为

引 言

高效液相色谱技术（high performance liquid chromatography，HPLC）是发展于20世纪60年代的一种快速、灵敏的色谱技术[1]，广泛应用于小分子[2-4]和大分子[5-7]等各种领域的分析和分离。高效液相色谱从分离模式出发可以分为高效反相色谱、高效亲和色谱、高效离子交换色谱、高效体积排阻色谱等几大类，其中高效反相色谱运用最为广泛。近年来，一些与HPLC相关的新的衍生或复合技术也被逐渐发展起来，如高效液相-质谱联用[8]、超高效液相[9]、高效液相色谱-多壁碳纳米管固相萃取[10]、高效液相毛细管电泳[11]等，不仅丰富了HPLC的研究范畴，也为化合物的精细分离和分析提供了新的技术突破。……