陈熙 郭健民 元宇 张玲莉 吴隽旎 孙忠广 陈炳霖 邹军

1.上海体育学院运动科学学院，上海 200438 2.温州医科大学体育科学学院，温州 325035 3.上海体育学院发展规划处，上海 200438

在人体内，成骨细胞和破骨细胞的动态平衡维持了体内的骨量[1]。机械应力刺激则是其平衡的重要调节因素，在骨生长和骨重建过程中发挥着重要的作用。较多的研究指出，各种机械应力如剪切力、牵张力、压力等都可以对骨细胞以及成骨细胞进行刺激，并促进成骨增殖和分化[2-4]。但是不同的应力强度，频率及刺激时间对成骨细胞的影响也不同，不适宜的牵张力则不利于成骨分化，甚至还会引起细胞凋亡[5]。另外，研究也指出，Wnt信号转导通路在骨的生长发育以及应力影响成骨分化中具有重要作用[1, 6]。因此，本研究采用不同强度和时间对MC3T3-E1细胞进行机械牵张干预，观察牵张应力对成骨细胞分化及Wnt信号转导通路的影响，探讨促进成骨分化的适宜机械牵张应力及其机制。

1 材料与方法

1.1 仪器与主要试剂

Flexcell-FX5000细胞力学系统；细胞培养箱(Thermo，USA)；荧光定量PCR仪(ABI StepOne 7300，USA)；蛋白电泳仪、(BioRad，USA)；酶联免疫检测仪(BioTek，USA)；α-MEM(Hyclone，USA)；胎牛血清(FBS)(Gibco，Australia)；0.25%胰酶、青霉素、链霉素、RIPA裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(碧云天)；抗坏血酸L、β-甘油磷酸钠(Sigma，USA)；Trizol、逆转录试剂盒；SYBR荧光定量试剂盒(Takara，宝生物)；β-actin、Phosphor-33/37-β-catenin(cell signal technology, USA)；Wnt1、β-catenin(abcam，USA)；引物合成于上海生物工程技术服务公司。

1.2 细胞培养

成骨细胞系MC3T3-E1(ATCC，CRL-2594)复苏后采用α-MEM培养液(含10%FBS+100 U/ml青霉素+0.1 mg/ml链霉素)，在37℃，5%CO2的培养箱中进行常规细胞培养。每3天换一次液，细胞长至70-80%融合时进行传代。……