方 莹 张小平 邬万新

胃癌细胞miR-100表达及对靶基因ZBTB7A的调控作用

方 莹 张小平 邬万新

目的探讨胃癌细胞miR-100表达及其对ZBTB7A基因的调控作用。方法使用人胃癌细胞株SGC-7901（低分化、转移）和BGC-823（低分化），将实验细胞分为SGC-7901miR-100组、SGC-7901miR-100抑制剂组、SGC-7901Si-阴性对照组、SGC-7901Si-ZBTB7A组、BGC-823 miR-100组、BGC-823 miR-100抑制剂组、BGC-823 Si-阴性对照组及BGC-823 Si-ZBTB7A组。定量PCR法检测各组miR-100及ZBTB7A mRNA的表达，免疫印迹法检测ZBTB7A蛋白表达水平，细胞迁移与体外侵袭实验测定体外细胞迁移和侵袭能力，通过质粒构建及双荧光素酶报告基因检测ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性情况。结果荧光素酶报告基因检测显示，在miR-100过度表达的SGC7901和BGC823细胞中，与荧光素酶活性相关的ZBTB7A 3′UTR载体显著减少，分别为（46.4±1.9）%和（55.7±2.3）%；miR-100被敲除时，ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性上调，分别为（32.7±1.9）%和（25.4±3.3）%。蛋白免疫印迹法显示，过表达的miR-100导致SGC7901和BGC823细胞中ZBTB7A表达的蛋白水平分别降低（81.8±3.8）%和（62.9± 1.3）%；当miR-100被敲除时，ZBTB7A的蛋白水平分别上调（38.1±2.7）%和（46.5±3.4）%。结论ZBTB7A是miR-100的靶基因，miR-100表达可以下调ZBTB7A的表达，从而抑制胃癌细胞的转移和生长。

胃癌；miR-100；ZBTB7A

胃癌是一个重大的世界性的公共卫生问题，是癌症相关致死的第二大常见原因[1]，当前对miRNA的研究给胃癌的治疗提供了新的策略和方向。miR-100是一种非编码、由20～25核苷酸组成的RNA，属于MicroRNAs（miRNAs）的一种，常在人类癌症中出现异常表达，ZBTB7A是一个肿瘤抑制基因，而在胃癌中，ZBTB7A基因是否是miR-100的靶点，以及对胃癌的转移和侵袭的联系仍然未知，本文以此为出发点，探究胃癌中miR-100的异常表达对ZBTB7A基因的作用。

1 实验材料

1.1 实验细胞系使用人胃癌细胞株SGC-7901（低分化、转移）和BGC-823（低分化）。……